跳转到内容

DB11/T 1804-2025 实验动物 繁育与遗传监测:修订间差异

来自LabAnimalWiki
Changzai留言 | 贡献
创建空白页面
 
Changzai留言 | 贡献
无编辑摘要
 
(未显示同一用户的2个中间版本)
第1行: 第1行:
ICS 65.020.30


CCS B 44
DB11
北       京       市       地       方       标       准
DB11/T 1804—2025
代替 DB11/T 1804—2020   
实验动物 繁育与遗传监测
Laboratory animal—Breeding and genetic monitoring                   
2025-04-01 发布                                                        2025-07-01 实施
北京市市场监督管理局     发 布 
== 目       次 ==
前言............................................................................................................................................... II
1      范围............................................................................................................................................ 1
2      规范性引用文件.......................................................................................................................... 1
3      术语和定义................................................................................................................................. 1
4      缩略语........................................................................................................................................ 2
5      遗传分类及命名原则................................................................................................................... 2
6      繁殖方法..................................................................................................................................... 4
7      遗传监测..................................................................................................................................... 5
附录 A(规范性)     实验动物微卫星 DNA 标记遗传检测方法............................................................. 8
附录 B(规范性)     实验斑马鱼 SNP 遗传标记的检测方法............................................................... 27
附录 C(规范性)     MHC 单倍型实验鸡和实验鸭直接测序检测方法.................................................... 30
参考文献......................................................................................................................................... 35 
前   言
本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则  第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
本文件代替DB11/T 1804—2020《实验动物 繁育与遗传监测》,主要技术变化如下:
a)     增加了“实验树鼩繁育与遗传监测”相关内容(见 5、6、7、附录 A);
b)     近交系实验动物抽样数量(见  7.2.2)。
本文件由北京市科学技术委员会、中关村科技园区管理委员会提出并归口。本文件由北京市科学技术委员会、中关村科技园区管理委员会组织实施。
本文件起草单位:首都医科大学、中国食品药品检定研究院、北京市实验动物管理办公室、中国医学科学院医学实验动物研究所、中国人民解放军军事医学研究院、国家卫生健康委员会科学技术研究所、杭州医学院、吉林大学、中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、中国农业科学院北京畜牧兽医研究所、北京市标准化研究院、北京华阜康生物科技股份有限公司、北京康蓝生物技术有限公司、中国科学院水生生物研究所、北京大学、清华大学、中国医学科学院医学生物学研究所、中国科学院昆明动物研究所。
本文件主要起草人:陈振文、李根平、贺争鸣、李长龙、刘云波、孙德明、岳秉飞、李奎、杨述林、冯书堂、杜小燕、向志光、王洪、董罡、任文陟、陈洪岩、陈继兰、巩薇、冯育芳、郭红刚、王熙、李吏、王锡乐、刘文菊、谢佳琪、樊子风、萨晓婴、刘先菊、丛日旭、腾永康、肖冲、魏杰、于鹏丽、牟玉莲、公维华、张宁波、徐玲玲、崔宗斌、张博、孙荣泽、韩凌霞、常在、刘苗苗、唐倩倩、代解杰、吕龙宝、王文广、王芸、马玉华。
本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为:
——首次发布分别为DB11/T 828.3—2011、DB11/T 1053.3—2013、DB11/T 1461.1—2017、DB11/T 1461.2—2017、DB11/T 1461.3—2017、DB11/T 1461.4—2018、DB11/T 1461.5—2018;
——2020年发布为DB11/T  1804—2020;
——本次为第二次修订。 
= 实验动物 繁育与遗传监测 = 
== 1      范围 ==
本文件规定了实验动物的遗传分类及命名原则、繁殖方法和遗传检测。
本文件适用于实验小型猪、实验猪、实验牛、实验羊、实验狨猴、实验长爪沙鼠、实验猫、实验雪貂、实验鸡、实验鸭、实验鹅、实验鸽、实验鱼(斑马鱼和剑尾鱼)、实验树鼩的繁育和遗传监测。
== 2      规范性引用文件 ==
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB 14923       实验动物 遗传质量控制
{| class="wikitable"
| valign="top" |GB/T
| valign="top" |2416
| valign="top" |东北细毛羊
|-
| valign="top" |GB/T
| valign="top" |3157
| valign="top" |中国荷斯坦牛
|-
| valign="top" |GB/T
| valign="top" |19166
| valign="top" |中国西门塔尔牛
|-
| valign="top" |GB/T
| valign="top" |19376
| valign="top" |波尔山羊种羊
|-
| valign="top" |GB/T
| valign="top" |22283
| valign="top" |长白猪种猪
|-
| valign="top" |GB/T
| valign="top" |22284
| valign="top" |大约克夏猪种猪
|-
| valign="top" |GB/T
| valign="top" |22285
| valign="top" |杜洛克猪种猪
|-
| valign="top" |GB/T
| valign="top" |22909
| valign="top" |小尾寒羊
|-
| valign="top" |GB/Z
| valign="top" |34792
| valign="top" |实验动物      引种技术规程
|}
NY/T 14      高产奶牛饲养管理规范
NY 625      迪卡配套系猪种猪
{| class="wikitable"
| valign="top" |NY/T
| valign="top" |1339
| valign="top" |肉牛育肥良好管理规范
|-
| valign="top" |NY/T
| valign="top" |1446
| valign="top" |种公牛饲养管理技术规程
|-
| valign="top" |NY/T
| valign="top" |1673
| valign="top" |畜禽微卫星DNA遗传多样性检测技术规程
|-
| valign="top" |NY/T
| valign="top" |1901
| valign="top" |鸡遗传资源保种场保种技术规范
|-
| valign="top" |NY/T
| valign="top" |2662
| valign="top" |标准化养殖场       奶牛
|-
| valign="top" |NY/T
| valign="top" |2665
| valign="top" |标准化养殖场       肉羊
|}
== 3      术语和定义 ==
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
实验动物   laboratory animal
经人工饲育,对其携带的微生物和寄生虫实行控制,遗传背景明确或者来源清楚,用于科学研究、
教学、生产和检定以及其他科学实验的动物。
3.2
实验种群   experimental population
以远交方式进行繁殖生产的实验动物群体。
3.3
封闭群   closed colony
不引进外部动物、在群体内随机选择种动物进行繁殖,以维持有限杂合度的实验动物种群。
3.4
近交系   inbred strain
一个动物群体中,任何个体基因组中98.6%以上的座位为纯合的品系。
注:经典近交系经至少连续20代的全同胞兄妹交配培育而成。品系内所有个体都可追湖到起源于第  20  代或以后代
数的一对共同祖先。经连续 20代以上亲子交配与全同胞兄妹交配有等同效果。近交系的近交系数(inbreeding coefficient)大于98.6%。
3.5
单倍型群体   haplotype population
通过近亲交配繁殖方式培育出的单倍体基因型一致的实验动物群体。
3.6
杂交群   hybrids
由两个不同近交系杂交产生的后代群体。
注:子一代简称F1。
== 4      缩略语 ==
下列缩略语适用于本文件。
PCR:聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction) SNP: 单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism) STR: 短串联重复序列(Short Tandem Repeat)
== 5      遗传分类及命名原则 ==
=== 5.1     遗传分类 ===
根据不同品种品系动物及个体间遗传差异将实验动物分为实验种群、封闭群、近交系、单倍型群体
和杂交群,具体符合表1的要求。
表1   实验动物遗传分类表
{| class="wikitable"
| valign="top" |实验动物群体
| valign="top" |遗传分类
|-
| valign="top" |实验长白猪
| rowspan="2" valign="top" |实验种群
|-
| valign="top" |实验大约克夏猪
|-
| valign="top" |实验杜洛克猪
| rowspan="9" valign="top" |   
实验种群
|-
| valign="top" |实验中国荷斯坦牛
|-
| valign="top" |实验西门塔尔牛
|-
| valign="top" |实验波尔山羊
|-
| valign="top" |实验小尾寒羊
|-
| valign="top" |实验东北细毛羊
|-
| valign="top" |实验狨猴
|-
| valign="top" |实验猫
|-
| valign="top" |实验雪貂
|-
| valign="top" |实验长爪沙鼠
| rowspan="9" valign="top" |   
封闭群
|-
| valign="top" |实验鸡
|-
| valign="top" |实验鸭
|-
| valign="top" |实验鹅
|-
| valign="top" |实验鸽
|-
| valign="top" |实验小型猪
|-
| valign="top" |实验斑马鱼
|-
| valign="top" |实验剑尾鱼
|-
| valign="top" |实验树鼩
|-
| valign="top" |实验小型猪
| rowspan="3" valign="top" |
近交系
|-
| valign="top" |实验斑马鱼
|-
| valign="top" |实验剑尾鱼
|-
| valign="top" |实验鸡
| rowspan="2" valign="top" |单倍型群体
|-
| valign="top" |实验鸭
|}
=== 5.2     命名原则 ===
5.2.1         实验种群
在原有的品种品系名称前面加上实验,如实验长白猪。
5.2.2         封闭群
由2~4个大写英文字母命名。种群名称前标明保持者的英文缩写名称,第一个字母大写,后面的字母小写,宜不超过4个字母。保持者与种群名称之间用冒号分开。
5.2.3         近交系
以大写英文字母或大写英文字母加阿拉伯数字命名,符号应简短。
5.2.4         单倍型群体
以单倍体基因型英文名称(或缩写)加英文字母和阿拉伯数字命名,符号应简短。
5.2.5         杂交群
以雌性亲代名称在前,雄性亲代名称居后,二者之间以大写英文字母“”相连表示杂交。将以上部分用括号括起,再在其后标明杂交的代数(如F1、F2等)。
== 6      繁殖方法 ==
=== 6.1     实验种群 ===
6.1.1         引种
选择双亲健康、无遗传疾病、繁殖性能好、体貌符合品种特征的动物作为种用动物。
6.1.2         繁育方法
实验猪按照NY 625的规定进行。
实验西门塔尔牛按照NY/T 1339和NY/T 1446规定执行,实验中国荷斯坦牛按照NY/T 14和NY/T 2662
的规定进行。
实验羊应按照GB 14923和NY/T 2665的规定进行。实验狨猴和雪貂应按GB 14923的规定进行。
实验猫按照雌雄5:1以上比例进行繁殖。
=== 6.2     封闭群 ===
6.2.1         引种
作为繁殖用种子的封闭群动物应三代以内无共同亲代并符合GB/Z 34792对封闭群种用动物的要求。
封闭群实验长爪沙鼠、实验鸽和实验树鼩引种数量不少于25对。
封闭群实验小型猪引种数量不少于13对(循环交配方式繁殖)或25对(随机交配方式繁殖)。封闭群实验鱼(斑马鱼和剑尾鱼)引种数目不少于100尾。
实验鸡、实验鸭和实验鹅引种规模按照NY/T 1901执行。
其他封闭群实验动物引种规模按照GB 14923规定执行。
6.2.2         繁育方法
封闭群实验小型猪、实验长爪沙鼠、实验鸽和实验树鼩繁殖方法按照GB 14923的规定执行。实验鸡、实验鸭、实验鹅应按照NY/T 1901的规定进行。
=== 6.3     近交系 ===
6.3.1         引种
作为繁殖用种子的近交系动物应符合GB/Z 34792对近交系种用动物的要求。
6.3.2         繁育方法
近交系实验动物可分为基础群(foundation stock)、血缘扩大群(pedigree expansion stock)和生产群(production stock),当近交系动物生产供应数量不是很大时,可不设血缘扩大群,仅设基础群和生产群。各基础群、血缘扩大群和生产群的繁育方式按照GB 14923执行。
=== 6.4     单倍型群体 ===
6.4.1         引种
作为繁殖用种子的单倍型群体动物按照GB/Z 34792的规定执行。
6.4.2         繁育方法
以全同胞或半同胞兄妹交配方式进行。
=== 6.5     杂交群 ===
将不同品系实验动物的亲代雌性与亲代雄性杂交,即可得到F1实验动物。
== 7      遗传监测 ==
=== 7.1     遗传要求 ===
遗传满足以下要求:
——体貌符合品种特征;
——谱系记录清楚;
——繁殖方法科学;
——群体遗传符合品种特征;
——遗传质量检测合格。
=== 7.2     遗传检测 ===
7.2.1         检测频率
每12个月至少进行一次检测。
7.2.2         抽样
7.2.2.1          实验种群和封闭群抽样数量
从每个种群中随机抽取非同窝成年实验动物的血液或其他组织,雌雄各半。抽样数量按照表2规定执行。
表2   实验种群和封闭群遗传检测抽样数量
{| class="wikitable"
| valign="top" |群体大小(只/头/羽)
| valign="top" |抽样数量(只/头/羽)
|-
| valign="top" |<100
| valign="top" |≥15
|-
| valign="top" |≥100
| valign="top" |≥30
|}
7.2.2.2          近交系实验动物抽样数量
基础群留种动物的双亲均应进行遗传检测;各生产群体采取随机抽取非同窝成年动物雌雄各半,抽样数量按照表3规定执行。一般不超过 30只。
表3   近交系实验动物遗传检测抽样数量
{| class="wikitable"
| valign="top" |群体大小(只/头/羽/尾)
| valign="top" |抽样数量(只/头/羽/尾)
|-
| valign="top" |<100
| valign="top" |≥6
|-
| valign="top" |≥100
| valign="top" |≥群体数量×6%
|}
7.2.3         遗传检测方法
采用群体遗传结构评估、微卫星DNA标记、SNP分子标记和直接测序等检测方法,在有检测能力的实验室进行,具体按照表4规定执行。
表4   遗传检测方法适用实验动物群体
{| class="wikitable"
| valign="top" |实验动物群体
| valign="top" |遗传分类
| valign="top" |检测方法
| valign="top" |执行标准或方法
|-
| valign="top" |实验长白猪
| rowspan="11" valign="top" |     
实验种群
| rowspan="8" valign="top" |   
群体遗传结构评估
| valign="top" |按照 GB/T 22283 的规定执行
|-
| valign="top" |实验大约克夏猪
| valign="top" |按照 GB/T 22284 的规定执行
|-
| valign="top" |实验杜洛克猪
| valign="top" |按照 GB/T 22285 的规定执行
|-
| valign="top" |实验中国荷斯坦牛
| valign="top" |按照 GB/T 3157 的规定执行
|-
| valign="top" |实验西门塔尔牛
| valign="top" |按照 GB/T 19166 的规定执行
|-
| valign="top" |实验波尔山羊
| valign="top" |按照 GB/T 19376 的规定执行
|-
| valign="top" |实验小尾寒羊
| valign="top" |按照 GB/T 22909 的规定执行
|-
| valign="top" |实验东北细毛羊
| valign="top" |按照 GB/T 2416 的规定执行
|-
| valign="top" |实验狨猴
| rowspan="13" valign="top" |       
微卫星 DNA 标记检测法
| rowspan="13" valign="top" |       
按照附录 A 的规定执行
|-
| valign="top" |实验猫
|-
| valign="top" |实验雪貂
|-
| valign="top" |实验长爪沙鼠
| rowspan="9" valign="top" |   
封闭群
|-
| valign="top" |实验鸡
|-
| valign="top" |实验鸭
|-
| valign="top" |实验鹅
|-
| valign="top" |实验鸽
|-
| valign="top" |实验小型猪
|-
| valign="top" |实验斑马鱼
|-
| valign="top" |实验剑尾鱼
|-
| valign="top" |实验树鼩
|-
| valign="top" |实验小型猪
| rowspan="3" valign="top" |
近交系
|-
| valign="top" |实验斑马鱼
| rowspan="2" valign="top" |SNP 分子标记检测法
| rowspan="2" valign="top" |按照附录 B 的规定执行
|-
| valign="top" |实验剑尾鱼
|-
| valign="top" |实验鸡
| rowspan="2" valign="top" |单倍型群体
| rowspan="2" valign="top" |直接测序检测法
| rowspan="2" valign="top" |按照附录 C 的规定执行
|-
| valign="top" |实验鸭
|}
7.2.4         结果判定
7.2.4.1          实验种群检测结果判定
7.2.4.1.1            群体遗传结构评估
当实验猪、实验牛、实验羊体貌特征与品种品系特征相符合时,判定合格,否则判定不合格。
7.2.4.1.2            微卫星 DNA 标记检测法
实验狨猴、实验猫和实验雪貂适用于微卫星DNA标记检测法,具体按照附录A规定执行。
7.2.4.2          封闭群实验检测结果判定
封闭群实验长爪沙鼠、实验鸡、实验鸭、实验鹅、实验鹅、实验小型猪、实验鱼(斑马鱼和剑尾鱼)和实验树鼩采用微卫星DNA标记检测法,具体按照附录A规定执行
7.2.4.3          单倍型群体检测结果判定
单倍型实验鸡和实验鸭采用聚合酶链式反应(PCR)产物直接测序法,具体按照附录C规定执行。
7.2.4.4          近交系检测结果判定
7.2.4.4.1            微卫星 DNA 标记检测法
近交系实验小型猪采用微卫星DNA标记检测法,具体按照附录A规定执行。
7.2.4.4.2            SNP 分子标记检测法
近交系实验鱼采用SNP分子标记检测法,具体按照附录B规定执行。 
附   录   A
(规范性)
实验动物微卫星 DNA 标记遗传检测方法
A.1     基因组DNA的提取
基因组DNA提取方法按照NY/T 1673的规定执行。
A.2     微卫星位点
A.2.1       用于检测封闭群和近交系实验小型猪遗传质量的微卫星位点分别为25个和10个,各微卫星位点的名称、染色体位置、引物序列、等位基因数、等位基因范围和退火温度按照表A.1的规定执行。
表A.1   实验小型猪微卫星位点的引物序列、退火温度、等位基因数及等位基因分布范围
{| class="wikitable"
| valign="top" |位点
| valign="top" |引物序列(5´~3´)
| valign="top" |所在染色
| valign="top" |Mg2+浓度
(mM)
| valign="top" |退火温度
(℃)
| valign="top" |等位基
因数
| valign="top" |等位基因
范围
| valign="top" |适用群体
|-
| valign="top" |SW974
| valign="top" |GGTGAAGTTTTTGCTTTGAACC
GAAAGAAATCCAAATCCAAACC
| valign="top" |1
| valign="top" |2.0
| valign="top" |58
| valign="top" |17
| valign="top" |129~175
| valign="top" |封闭群
|-
| valign="top" |S0091
| valign="top" |TCTACTCCAGGAGATAAGCCAGAT
CAGTGACTCCATGCACAGTTATGA
| valign="top" |2
| valign="top" |1.5
| valign="top" |55
| valign="top" |14
| valign="top" |96~174
| valign="top" |封闭群
|-
| valign="top" |SW240
| valign="top" |AGAAATTAGTGCCTCAAATTGG
AAACCATTAAGTCCCTAGCAAA
| valign="top" |2
| valign="top" |1.5
| valign="top" |58
| valign="top" |11
| valign="top" |92~114
| valign="top" |封闭群
|-
| valign="top" |SW1066
| valign="top" |GCAGGATGAACCACCCTG
CTCTTGAGGCAACCTGCTG
| valign="top" |3
| valign="top" |2.0
| valign="top" |60
| valign="top" |19
| valign="top" |166~214
| valign="top" |封闭群
|-
| valign="top" |SW1089
| valign="top" |TTTTCCCCTTCACTCACCC
GATCAAAGTCCCTTACTCCGG
| valign="top" |4
| valign="top" |1.5
| valign="top" |58
| valign="top" |10
| valign="top" |142~190
| valign="top" |封闭群
|-
| valign="top" |S0005
| valign="top" |TCCTTCCCTCCTGGTAACTA
GCACTTCCTGATTCTGGGTA
| valign="top" |5
| valign="top" |2.0
| valign="top" |54
| valign="top" |11
| valign="top" |204~244
| valign="top" |封闭群
|-
| valign="top" |SW1057
| valign="top" |TCCCCTGTTGTACAGATTGATG
TCCAATTCCAAGTTCCACTAGC
| valign="top" |6
| valign="top" |2.0
| valign="top" |58
| valign="top" |14
| valign="top" |142~191
| valign="top" |封闭群
|-
| valign="top" |SW632
| valign="top" |TGGGTTGAAAGATTTCCCAA
GGAGTCAGTACTTTGGCA
| valign="top" |7
| valign="top" |2.0
| valign="top" |54
| valign="top" |9
| valign="top" |148~173
| valign="top" |封闭群
|-
| valign="top" |OPN
| valign="top" |CCAATCCTATTCACGAAAAAGC
CAACCCACTTGCTCCCAC
| valign="top" |8
| valign="top" |2.0
| valign="top" |59
| valign="top" |12
| valign="top" |138~170
| valign="top" |封闭群
|-
| valign="top" |SW29
| valign="top" |AGGGTGGCTAAAAAAGAAAAGG
ATCAAATCCTTACCTCTGCAGC
| valign="top" |8
| valign="top" |2.0
| valign="top" |61
| valign="top" |12
| valign="top" |133~187
| valign="top" |封闭群
|-
| valign="top" |SW911
| valign="top" |CTCAGTTCTTTGGGACTGAACC
CATCTGTGGAAAAAAAAAGCC
| valign="top" |9
| valign="top" |2.0
| valign="top" |60
| valign="top" |14
| valign="top" |151~178
| valign="top" |封闭群
|-
| valign="top" |SW511
| valign="top" |AAGCAGGAATCCCTGCATC
CCCAGCCACCAGTCTGAC
| valign="top" |9
| valign="top" |1.5
| valign="top" |62
| valign="top" |12
| valign="top" |161~196
| valign="top" |封闭群
|}
表 A.1   实验小型猪微卫星位点的引物序列、退火温度、等位基因数及等位基因分布范围(续)
{| class="wikitable"
| valign="top" |位点
| valign="top" |引物序列(5´~3´)
| valign="top" |所在染色
| valign="top" |Mg2+浓度
(mM)
| valign="top" |退火温度
(℃)
| valign="top" |等位基
因数
| valign="top" |等位基因
范围
| valign="top" |适用群体
|-
| valign="top" |SWr158
| valign="top" |TCCAATTCAACTCCTGGCTC
GAATGTGCACATACCACATGC
| valign="top" |10
| valign="top" |2.0
| valign="top" |60
| valign="top" |18
| valign="top" |158~200
| valign="top" |封闭群
|-
| valign="top" |SW951
| valign="top" |TTTCACAACTCTGGCACCAG
GATCGTGCCCAAATGGAC
| valign="top" |10
| valign="top" |1.5
| valign="top" |58
| valign="top" |14
| valign="top" |108~142
| valign="top" |封闭群
|-
| valign="top" |SW271
| valign="top" |TTCCAGTGGCTTTCTGTGC
CATTCATTCCCAGTGAAACTTG
| valign="top" |11
| valign="top" |1.5
| valign="top" |58
| valign="top" |13
| valign="top" |111~144
| valign="top" |封闭群
|-
| valign="top" |S0386
| valign="top" |TCCTGGGTCTTATTTTCTA
TTTTTATCTCCAACAGTAT
| valign="top" |11
| valign="top" |2.0
| valign="top" |48
| valign="top" |12
| valign="top" |155~178
| valign="top" |封闭群
|-
| valign="top" |S0068
| valign="top" |CCTTCAACCTTTGAGCAAGAAC
AGTGGTCTCTCTCCCTCTTGCT
| valign="top" |13
| valign="top" |2.0
| valign="top" |62
| valign="top" |10
| valign="top" |210~256
| valign="top" |封闭群
|-
| valign="top" |SWr1008
| valign="top" |ACAGCCACCAACAGTGTTTG
GAACTTCCATATGCTGCAAGTG
| valign="top" |13
| valign="top" |2.0
| valign="top" |62
| valign="top" |16
| valign="top" |98~256
| valign="top" |封闭群
|-
| valign="top" |S0007
| valign="top" |TTACTTCTTGGATCATGTC
GTCCCTCCTCATAATTTCTG
| valign="top" |14
| valign="top" |2.0
| valign="top" |54
| valign="top" |15
| valign="top" |142~192
| valign="top" |封闭群
|-
| valign="top" |SW857
| valign="top" |TGAGAGGTCAGTTACAGAAGACC
GATCCTCCTCCAAATCCCAT
| valign="top" |14
| valign="top" |2.0
| valign="top" |58
| valign="top" |16
| valign="top" |129~173
| valign="top" |封闭群
|-
| valign="top" |SWr312
| valign="top" |ATCCGTGCGTGTGTGCAT
CTGGTGGCTACAGTTCCGAT
| valign="top" |15
| valign="top" |1.5
| valign="top" |64
| valign="top" |11
| valign="top" |116~136
| valign="top" |封闭群
|-
| valign="top" |SW81
| valign="top" |GATCTGGTCCTGCACAGGG
GGGGCTCTCAGGAAGGAG
| valign="top" |16
| valign="top" |1.5
| valign="top" |60
| valign="top" |8
| valign="top" |128~144
| valign="top" |封闭群
|-
| valign="top" |SWr1120
| valign="top" |CAAATGGAACCCATTACAGTCC
ACTCCTAGCCCAGGAGCTTC
| valign="top" |17
| valign="top" |1.5
| valign="top" |60
| valign="top" |11
| valign="top" |147~178
| valign="top" |封闭群
|-
| valign="top" |S0062
| valign="top" |AAGATCATTTAGTCAAGGTCACAG
TCTGATAGGGAACATAGGATAAAT
| valign="top" |18
| valign="top" |2.0
| valign="top" |56
| valign="top" |12
| valign="top" |144~204
| valign="top" |封闭群
|-
| valign="top" |S0218
| valign="top" |GTGTAGGCTGGCGGTTGT
CCCTGAAACCTAAAGCAAAG
| valign="top" |X
| valign="top" |1.5
| valign="top" |54
| valign="top" |11
| valign="top" |158~196
| valign="top" |封闭群
|-
| valign="top" |CGA
| valign="top" |ATAGACATTATGTAAGTTGCTGAT
GAACTTTCACATCCCTAAGGTCGT
| valign="top" |1q
| valign="top" |2.5
| valign="top" |55
| valign="top" |12
| valign="top" |250~320
| valign="top" |近交系
|-
| valign="top" |SW240
| valign="top" |AGAAATTAGTGCCTCAAATTGG
AAACCATTAAGTCCCTAGCAAA
| valign="top" |2P
| valign="top" |1.5
| valign="top" |55
| valign="top" |8
| valign="top" |96~115
| valign="top" |近交系
|-
| valign="top" |SW72
| valign="top" |ATCAGAACAGTGCGCCGT
GTTTGAAAATGGGGTGTTTCC
| valign="top" |3P
| valign="top" |1.5
| valign="top" |55
| valign="top" |8
| valign="top" |100~116
| valign="top" |近交系
|-
| valign="top" |S0005
| valign="top" |TCCTTCCCTCCTGGTAACTA
GCACTTCCTGATTCTGGGTA
| valign="top" |5q
| valign="top" |3.0
| valign="top" |55
| valign="top" |10
| valign="top" |205~248
| valign="top" |近交系
|-
| valign="top" |S0090
| valign="top" |CCAAGACTGCCTTGTAGGTGAATA
GCTATCAAGTATTGTACCATTAGG
| valign="top" |12q
| valign="top" |1.5
| valign="top" |55
| valign="top" |4
| valign="top" |244~251
| valign="top" |近交系
|-
| valign="top" |SW769
| valign="top" |GGTATGACCAAAAGTCCTGGG
TCTGCTATGTGGGAAGAATGC
| valign="top" |13
| valign="top" |3.0
| valign="top" |55
| valign="top" |7
| valign="top" |106~140
| valign="top" |近交系
|}
表 A.1   实验小型猪微卫星位点的引物序列、退火温度、等位基因数及等位基因分布范围(续)
{| class="wikitable"
| valign="top" |位点
| valign="top" |引物序列(5´~3´)
| valign="top" |所在染色
| valign="top" |Mg2+浓度
(mM)
| valign="top" |退火温度
(℃)
| valign="top" |等位基
因数
| valign="top" |等位基因
范围
| valign="top" |适用群体
|-
| valign="top" |SW857
| valign="top" |TGAGAGGTCAGTTACAGAAGACC
GATCCTCCTCCAAATCCCAT
| valign="top" |14
| valign="top" |1.5
| valign="top" |55
| valign="top" |6
| valign="top" |144~160
| valign="top" |近交系
|-
| valign="top" |S0355
| valign="top" |TCTGGCTCCTACACTCCTTCTTGATG
GTTTGGGTGGGTGCTGAAAAATAGGA
| valign="top" |15
| valign="top" |3.0
| valign="top" |55
| valign="top" |14
| valign="top" |243~277
| valign="top" |近交系
|-
| valign="top" |SW24
| valign="top" |CTTTGGGTGGAGTGTGTGC
ATCCAAATGCTGCAAGCG
| valign="top" |17
| valign="top" |1.5
| valign="top" |55
| valign="top" |8
| valign="top" |96~121
| valign="top" |近交系
|-
| valign="top" |S0218
| valign="top" |GTGTAGGCTGGCGGTTGT
CCCTGAACCCTAAAGCAAAG
| valign="top" |X
| valign="top" |1.5
| valign="top" |55
| valign="top" |8
| valign="top" |164~184
| valign="top" |近交系
|}
A.2.2       用于检测实验狨猴遗传质量的微卫星位点为20个,各微卫星位点的名称、引物序列、等位基因
数、等位基因范围和退火温度按照表A.2的规定执行。
表A.2   实验狨猴微卫星位点的引物序列、退火温度、等位基因数及等位基因分布范围
{| class="wikitable"
| valign="top" |位点
| valign="top" |引物序列(5´~3´)
| valign="top" |退火温度(℃)
| valign="top" |最大等位基因数
| valign="top" |等位基因分布范围
|-
| valign="top" |CAJA1
| valign="top" |GAAGACGGGGGCGTAAATA
TGTGGTGGCTCATACCTGAA
| valign="top" |60
| valign="top" |9
| valign="top" |386~402
|-
| valign="top" |CAJA6
| valign="top" |GAGCACCAAGATTGGCATTT
CCAATACACATCGGCTTTGA
| valign="top" |60
| valign="top" |6
| valign="top" |235~243
|-
| valign="top" |CAJA10
| valign="top" |ACCCTACATTGCCAAATTGC
GCCTCTTCTGAGGGAAGTGA
| valign="top" |60
| valign="top" |6
| valign="top" |198~208
|-
| valign="top" |CAJA11
| valign="top" |CGAAAGTGTGCTCAACAGGA
AAGGTGGGATTCTGAAAGCA
| valign="top" |60
| valign="top" |5
| valign="top" |254~262
|-
| valign="top" |CAJA13
| valign="top" |AGCACATGAACACCCAGGTT
AGTGAAAACAGGCTGGGAGA
| valign="top" |60
| valign="top" |6
| valign="top" |378~390
|-
| valign="top" |CAJA14
| valign="top" |AGCACATGAACACCCAGGTT
AGTGAAAACAGGCTGGGAGA
| valign="top" |60
| valign="top" |6
| valign="top" |216~232
|-
| valign="top" |CAJA17
| valign="top" |GGGCACTCCAAGGTCAGTAA
TTGCCCCCTGCTTATTGTAG
| valign="top" |60
| valign="top" |10
| valign="top" |382~400
|-
| valign="top" |CAJA18
| valign="top" |ACTTGCAGGCCAGTGTTCTT
TGGACAGCTGAGGTTTCCTT
| valign="top" |63
| valign="top" |8
| valign="top" |315~329
|-
| valign="top" |D10qham51
| valign="top" |CGGGAATTCAAAGGCGTTCT
AGGAGGATTTCGCATTTGGG
| valign="top" |60
| valign="top" |6
| valign="top" |103~117
|-
| valign="top" |Ham157
| valign="top" |CAGCCAACATGCTTCTCAGT
GGTGGAATAAATCAGGCTACCAG
| valign="top" |60
| valign="top" |6
| valign="top" |193~205
|-
| valign="top" |Ham60
| valign="top" |TGCTCTAGAGGTTCCACTCTG
GGCATGTTACCTAACCTCTCTG
| valign="top" |58
| valign="top" |8
| valign="top" |139~165
|-
| valign="top" |Ham65
| valign="top" |TGAGAACGACTGCTCTAGGT
TGGAAGTGGCTTCATTCCTG
| valign="top" |58
| valign="top" |10
| valign="top" |177~201
|}
表 A.2   实验狨猴微卫星位点的引物序列、退火温度、等位基因数及等位基因分布范围(续)
{| class="wikitable"
| valign="top" |位点
| valign="top" |引物序列(5´~3´)
| valign="top" |退火温度(℃)
| valign="top" |最大等位基因数
| valign="top" |等位基因分布范围
|-
| valign="top" |Ham181
| valign="top" |CAATGAGATGTGTCCAAGTGAG
CCAAACACCCAATATGCAGT
| valign="top" |58
| valign="top" |7
| valign="top" |213~239
|-
| valign="top" |Ham184
| valign="top" |GGCGCAGCTCATCTCTTCAC
CCTCCCCAGCATCTTCAAGAC
| valign="top" |63
| valign="top" |7
| valign="top" |150~172
|-
| valign="top" |Ham125
| valign="top" |GTGGGTAAATGCTGCCATCT
GTTTCAACTCCTGCGTCTAGTC
| valign="top" |59
| valign="top" |8
| valign="top" |187~201
|-
| valign="top" |Ham101
| valign="top" |AGACCAAGCATCTTCTTGGAC
CACCTTTAAACTGCTGTGGTTG
| valign="top" |59
| valign="top" |6
| valign="top" |281~297
|-
| valign="top" |Ham61
| valign="top" |CAAAGATGCTTGGGGATGGA
AAGATCTTGCAGGGCGTAAG
| valign="top" |61
| valign="top" |10
| valign="top" |263~287
|-
| valign="top" |Ham32
| valign="top" |GCCCAAATCCTGTTTGACAC
CCACCTAGATCATCGAGAGTAG
| valign="top" |58
| valign="top" |7
| valign="top" |183~199
|-
| valign="top" |Ham100
| valign="top" |GACCAACTCCAAAGCTAGCA
GGTAACATGCTCTCGACCTT
| valign="top" |58
| valign="top" |8
| valign="top" |244~262
|-
| valign="top" |Ham26
| valign="top" |GCAAATTCGTGAAGCATTCC
AACAGTTGGATGAGTTCCAG
| valign="top" |59
| valign="top" |8
| valign="top" |182~206
|}
A.2.3       用于检测实验长爪沙鼠遗传质量的微卫星位点为28个,各微卫星位点的名称、引物序列、等位
基因数、等位基因范围和退火温度按照表A.3的规定执行。
表A.3   实验长爪沙鼠微卫星位点的引物序列、退火温度、等位基因数及等位基因分布范围
{| class="wikitable"
| valign="top" |位点
| valign="top" |引物序列(5´~3´)
| valign="top" |退火温度(℃)
| valign="top" |最大等位基因数
| valign="top" |等位基因分布范围
|-
| valign="top" |AF200942
| valign="top" |CAGGCACCCCCAGTTT
GTCTACACAGGCTGAGGATGT
| valign="top" |54
| valign="top" |15
| valign="top" |180~215
|-
| valign="top" |AF200943
| valign="top" |GGCTCCTGATTCTACATTTCT
CAACCATTGGCAACTCTC
| valign="top" |57
| valign="top" |17
| valign="top" |154~181
|-
| valign="top" |AF200944
| valign="top" |GCTGGGCTTTAATGTTTATTT
GGTGGCTCACACTTTCTGT
| valign="top" |54
| valign="top" |19
| valign="top" |113~134
|-
| valign="top" |AF200946
| valign="top" |TTTCTGGGGTCTCTTTCTCTC
CCATTCTGCAAGACTCCTCT
| valign="top" |57
| valign="top" |28
| valign="top" |195~242
|-
| valign="top" |AF200945
| valign="top" |AGTCCCTATTACATCCACAAG
TTATCCTGCAAAGCCTAAG
| valign="top" |57
| valign="top" |12
| valign="top" |166~186
|-
| valign="top" |AF200941
| valign="top" |TGGGTCCTTTGGAAGA
TGGCTTAAAATGAATCACTTA
| valign="top" |55
| valign="top" |24
| valign="top" |115~153
|-
| valign="top" |AF200947
| valign="top" |GACAGAGTGGGAGGGGTATGT
TGGCAAGTTTGGTTTGTTTGA
| valign="top" |55
| valign="top" |17
| valign="top" |188~212
|-
| valign="top" |D16Mit7
| valign="top" |CTGCCACCCCTGAACCATTA
CTACAAGATGTGGGGCATGA
| valign="top" |52.6
| valign="top" |15
| valign="top" |480~529
|-
| valign="top" |D16Mit26
| valign="top" |CAGGAATAAAGTATAATGGGGTGC
CCCATGATCAGTTGGGTTTT
| valign="top" |49.1
| valign="top" |9
| valign="top" |207~266
|}
表 A.3   实验长爪沙鼠微卫星位点的引物序列、退火温度、等位基因数及等位基因分布范围(续)
{| class="wikitable"
| valign="top" |位点
| valign="top" |引物序列(5´~3´)
| valign="top" |退火温度(℃)
| valign="top" |最大等位基因数
| valign="top" |等位基因分布范围
|-
| valign="top" |D1Mit362
| valign="top" |TGTGTGACTGCTTGGAAGATG
CTGAGTCCCTAAAGTTGTCCTTG
| valign="top" |50.0
| valign="top" |16
| valign="top" |476~504
|-
| valign="top" |D8Mit184
| valign="top" |GTTTTTCTCAGAAGAATGCAATATACC
TGAGAAGAATGAGGAATTTGTCC
| valign="top" |48.1
| valign="top" |11
| valign="top" |196~229
|-
| valign="top" |D7Mit33
| valign="top" |TCTGAAGTTTGAATGGTTGTGG
TTTCAAAATCGTGTCATTTTGC
| valign="top" |47.3
| valign="top" |15
| valign="top" |376~394
|-
| valign="top" |D6Mit37
| valign="top" |AAAGAATTGCACATCCACTGG
TGCCCAGGATGTTTAAGAGG
| valign="top" |47.0
| valign="top" |14
| valign="top" |246~265
|-
| valign="top" |D5Mit31
| valign="top" |TCAGGGCTCTCTAAGGGACA
ACTATGCAGCCACCAAATCC
| valign="top" |53.1
| valign="top" |9
| valign="top" |318~350
|-
| valign="top" |D12Mit201
| valign="top" |CCACTGGATGGCAACAGAC
TATGTGTTTCAAAACCACACTCG
| valign="top" |53.1
| valign="top" |18
| valign="top" |245~283
|-
| valign="top" |D2Mit22
| valign="top" |GCTCCCTTTCCTCTTGAACC
GGGCCCTTATTCTATCTCCC
| valign="top" |49.1
| valign="top" |9
| valign="top" |173~192
|-
| valign="top" |D15Mit124
| valign="top" |AGGAGAGAACCAACTGCTGC
GGCCAGTGATGACTTTATAATGC
| valign="top" |59.8
| valign="top" |17
| valign="top" |232~258
|-
| valign="top" |D11Mit36
| valign="top" |CCAGAACTTTTGCTGCTTCC
GTGAGCCCTAGGTCCAGTGA
| valign="top" |58.7
| valign="top" |15
| valign="top" |234~256
|-
| valign="top" |D7Mit71
| valign="top" |CCACCTGGAATACATGTAACCC
TAAGATCCAAGAGATGGGTTAAGC
| valign="top" |49.1
| valign="top" |11
| valign="top" |165~200
|-
| valign="top" |D2Mit76
| valign="top" |CTCAAGTCTCACTTCTCTGCACA
ACACCCAAGGTTGACCTCTG
| valign="top" |47.3
| valign="top" |19
| valign="top" |281~328
|-
| valign="top" |D3Mit130
| valign="top" |AACACATGAAACGTGTGCGT
TGATAGGCATGCTTAAGCCC
| valign="top" |50.6
| valign="top" |11
| valign="top" |213~251
|-
| valign="top" |D19Mit1
| valign="top" |AATCCTTGTTCACTCTATCAAGGC
CATGAAGAGTCCAGTAGAAACCTC
| valign="top" |49.1
| valign="top" |15
| valign="top" |133~165
|-
| valign="top" |D11Mit35
| valign="top" |AGTAACATGGAACATCGACGG
TGCTCAGCTCTGGAGTGCTA
| valign="top" |48.1
| valign="top" |13
| valign="top" |287~307
|-
| valign="top" |D17Mit38
| valign="top" |CCTCTGAGGAGTAACCAAGCC
CACAGAGTTCTACCTCCAACCC
| valign="top" |52.6
| valign="top" |14
| valign="top" |195~251
|-
| valign="top" |DXMit17
| valign="top" |CCTGTTTGGGCACCTAGATT
TAATAACCCATGTTTTCTGTGGG
| valign="top" |48.1
| valign="top" |9
| valign="top" |234~251
|-
| valign="top" |D8Mit56
| valign="top" |ACACTCAGAGACCATGAGTACACC
GAGTTCACTACCCACAAGTCTCC
| valign="top" |50.6
| valign="top" |9
| valign="top" |100~126
|-
| valign="top" |D10Mit66
| valign="top" |TCTCCTTGGAATTCACAGCC
GACATTCCTTAAGAGAGACAGTCC
| valign="top" |54.7
| valign="top" |14
| valign="top" |272~298
|-
| valign="top" |D13Mit1
| valign="top" |TCATTCAACATTCTGTCAATCG
CACAACAAGGTTAACCTCTAGACA
| valign="top" |49.0
| valign="top" |14
| valign="top" |104~132
|}
A.2.4       用于检测封闭群实验雪貂遗传质量的微卫星位点为21个,各微卫星位点的名称、引物序列、重复等位基因数按照表A.4的规定执行。
表A.4   实验雪貂微卫星位点的引物序列、等位基因数及等位基因分布范围
{| class="wikitable"
| valign="top" |位点
| valign="top" |引物序列(5´~3´)
| valign="top" |等位基因分布范围
| valign="top" |重复等位基因数
|-
| valign="top" |Mpu
A4w1
| valign="top" |CACTTCCTCCCATGGACACT
CAAAGTCTCCCACCCTATGC
| valign="top" |152~174
| valign="top" |(AC)23
|-
| valign="top" |Mpu
A10w4
| valign="top" |TGGCCTATATGTGCAGATGAC
TGTTTGTCTTGTACCCTCTGACC
| valign="top" |154~158
| valign="top" |(AC)13(AC)7
|-
| valign="top" |Mpu
A121w7
| valign="top" |ACTGCCATCAGGTCATCTAGG
GGGTAGACACCTGGCTCAAG
| valign="top" |105~129
| valign="top" |(CA)14
|-
| valign="top" |Mpu
A129w7
| valign="top" |GGCCTCTGAACACATAGTTG
AAGTACAGAATGGAAGGATCTG
| valign="top" |197~205
| valign="top" |(CA)13
|-
| valign="top" |Mpu
A212w1
| valign="top" |CCCTATGAGGGCATGTTTGT
CTGCCATGTTTCCACTGGT
| valign="top" |137~153
| valign="top" |(TG)13
|-
| valign="top" |Mpu
A223w3
| valign="top" |GAAGACAGCACCCCAGAGTC
T GGTTGCCAAGAACTAGCAG
| valign="top" |213~239
| valign="top" |(GT)19
|-
| valign="top" |Mpu
A229w4
| valign="top" |GGGTAGGACGTGCTTAAAGATG
AGCCCTCAAAGCCTCTTCTC
| valign="top" |107~139
| valign="top" |(GT)11(TG)7
|-
| valign="top" |Mpu
A231w6
| valign="top" |CCTCTGGTAACCATCTGTTTG
TCTTCAAGATGTTCAGTGTGGA
| valign="top" |182~224
| valign="top" |(GT)15
|-
| valign="top" |Mpu
B1w4
| valign="top" |TCCACTACCTGGCCTCATTC
ACCTCAGGCTCCACTCTCAG
| valign="top" |178~190
| valign="top" |(CT)15(CA)8
(AC)5(AC)11
|-
| valign="top" |Mpu
B6w2
| valign="top" |T GGGTGTAGAGCATGTTTGG
TGCCTATTCCAGGTACCTCAT
| valign="top" |156~164
| valign="top" |(TC)18
|-
| valign="top" |Mpu
B9w7
| valign="top" |CGTTACCAACTGTGGCTGTG
TGCCTGGGCCTGTGATTA
| valign="top" |180~192
| valign="top" |(GA)18
|-
| valign="top" |Mpu
B12w3
| valign="top" |AGTCGACAGATGAGTCCACGAAG
TGTCACACATGGCAGGATCT
| valign="top" |175~179
| valign="top" |(AG)11(AC)8(AC)7
|-
| valign="top" |Mpu
B112w5
| valign="top" |CCATTACAAGTGCTTGGAGACA
TGGAACATGCTGGAAATTGT
| valign="top" |161~165
| valign="top" |(AG) 14
|-
| valign="top" |Mpu
B202w3
| valign="top" |TCTCCTCCTCCTCCTCCTTC
ATGAGATTGACCGTGCATCA
| valign="top" |164~168
| valign="top" |(CTC)5(GA)14
|-
| valign="top" |Mpu
B209w2
| valign="top" |TGCTTCTCCCTCTGACTGCT
CCGCCCAAGTATCCCTAAAT
| valign="top" |119~125
| valign="top" |(CT)16
|-
| valign="top" |Mpu
B217w3
| valign="top" |TTCCCTGCTTGTGCTCTCTT
TGGGGTAAGGGTAGGTATGC
| valign="top" |126~144
| valign="top" |(TC)5(TC)17
|-
| valign="top" |Mpu
C4w7
| valign="top" |CTGGCCCTATCACATACATATTCA
GGAAGTATACTCATGCCTGCAA
| valign="top" |147~163
| valign="top" |(TCCA)9
|-
| valign="top" |Mpu
C102w3
| valign="top" |GGGTGGATGGGTGAGTAGGTA
CCTTCCCACATTCCATCCTT
| valign="top" |119~135
| valign="top" |(TGGA)7
|}
表 A.4   实验雪貂微卫星位点的引物序列、等位基因数及等位基因分布范围(续)
{| class="wikitable"
| valign="top" |位点
| valign="top" |引物序列(5´~3´)
| valign="top" |等位基因分布范围
| valign="top" |重复等位基因数
|-
| valign="top" |Mpu
D207w5
| valign="top" |CAGGTGAAGAAGTCCCTCTGT
CTTGGTTCTGACCATTTGGA
| valign="top" |188~214
| valign="top" |(CT)10(ATAG)7
|-
| valign="top" |Mpu
D209w4
| valign="top" |GAACAGCAAGTAGTCCAACTCTCA
GTTGGATCCTTTCCATCACC
| valign="top" |165~185
| valign="top" |(TATC)7
|-
| valign="top" |Mpu
D231w2
| valign="top" |TTTGGGTTCCACAGTAGGTG
ATGCTCTCAATCCATGCTCA
| valign="top" |132~160
| valign="top" |(GATA)9
|}
A.2.5       用于检测实验猫遗传质量的微卫星位点为37个,各微卫星位点的名称、染色体位置、引物序列、
退火温度按照表A.5的规定执行。
表A.5   实验猫微卫星位点的扩增条件和染色体分布
{| class="wikitable"
| valign="top" |位点
| valign="top" |引物序列(5´~3´)
| valign="top" |染色体
| valign="top" |Mg2+浓度(mM)
| valign="top" |退火温度(℃)
|-
| valign="top" |FCA123
| valign="top" |CTTCACACTGCGAGAGGACT
TCTGACAGGCTCCAGGTTACT
| valign="top" |A1
| valign="top" |1.5
| valign="top" |57
|-
| valign="top" |FCA1062
| valign="top" |CTTCACACTGCGAGAGGACT
TCTGACAGGCTCCAGGTTACT
| valign="top" |A1
| valign="top" |1.5
| valign="top" |58
|-
| valign="top" |FCA522
| valign="top" |GTTTGAAATTATGGCTTCCCAACT
TCTGGAGAACAAGAGGGAAAAGT
| valign="top" |B1
| valign="top" |1.5
| valign="top" |54
|-
| valign="top" |FCA275
| valign="top" |TCACTCCTGGACTTAACCATCAG
TGCTATTGACGAAGGGGCAG
| valign="top" |B2
| valign="top" |1.5
| valign="top" |57
|-
| valign="top" |FCA848
| valign="top" |CTCCTTCACCAAAGGCTGGAT
GGACATTCTGGAAATGCGGAG
| valign="top" |B3
| valign="top" |1.5
| valign="top" |57
|-
| valign="top" |FCA664
| valign="top" |AGAAAAATGACTACCGACATGGTT
GAGTGCGGCTACTATCTGGG
| valign="top" |C1
| valign="top" |1.5
| valign="top" |56
|-
| valign="top" |FCA346
| valign="top" |AATGCCTAGGTAGCACTGTCC
CCCAAGTCACCCTCCTGTTG
| valign="top" |C2
| valign="top" |1.5
| valign="top" |58
|-
| valign="top" |FCA920
| valign="top" |CTAGTTGAAGGGGCCAGCAC
TCTGTCCAGCCCATAGGTGT
| valign="top" |D1
| valign="top" |1.5
| valign="top" |59
|-
| valign="top" |FCA221
| valign="top" |TGGCCCATTAAGCAAGAAGGT
TGGCTATGCCAGCAGTTGAA
| valign="top" |D3
| valign="top" |1.5
| valign="top" |57
|-
| valign="top" |FCA1014
| valign="top" |CTGGCAAGAAGTCCACTGGG
CATGGCTCCTGAGGTCATGT
| valign="top" |E3
| valign="top" |1.5
| valign="top" |58
|-
| valign="top" |FCA1015
| valign="top" |CTCCAGTGCCCATACGTTGT
TGGCCACAAAGATGGTTGTTC
| valign="top" |E3
| valign="top" |1.5
| valign="top" |57
|-
| valign="top" |FCA1016
| valign="top" |GTCACTAAGTGGTGACAGAGCA
AACGTTTGAAAGGTGTGCCT
| valign="top" |F1
| valign="top" |1.5
| valign="top" |56
|-
| valign="top" |FCA1030
| valign="top" |CGCCCGCAAAAAGACTCAAG
GGACGCCCACTAGCCAAATA
| valign="top" |F1
| valign="top" |1.5
| valign="top" |58
|-
| valign="top" |FCA1315
| valign="top" |CCTGCATCAGTTGATTCCTTGT
GGACCATCAGAATGCAGCTC
| valign="top" |F2
| valign="top" |1.5
| valign="top" |58
|}
表 A.5   实验猫微卫星位点的扩增条件和染色体分布(续)
{| class="wikitable"
| valign="top" |位点
| valign="top" |引物序列(5´~3´)
| valign="top" |染色体
| valign="top" |Mg2+浓度(mM)
| valign="top" |退火温度(℃)
|-
| valign="top" |FCA823
| valign="top" |AGGGTGTGCTAGAACTAGCTGG
CATTTAGAGGTTCAGGACTGGG
| valign="top" |B1
| valign="top" |1.5
| valign="top" |58
|-
| valign="top" |FCA770
| valign="top" |TCAAGAGTCTTTGCTCAAGGG
TTTACTTAGGACTGACAGGGCA
| valign="top" |A1
| valign="top" |1.5
| valign="top" |56
|-
| valign="top" |FCA559
| valign="top" |GCCAAAATGTTCAAGAGTGG
TTTTGGCTTGATGAGCATCA
| valign="top" |B1
| valign="top" |1.5
| valign="top" |55
|-
| valign="top" |FCA976
| valign="top" |TCCATTTACCTGGGAAATTCC
ACCCTCATGTCTTGGCAATC
| valign="top" |D4
| valign="top" |1.5
| valign="top" |55
|-
| valign="top" |FCA1240
| valign="top" |TCCTGATGTGGCAGTTAAACC
GCATGCCTTGAACCTTTCAT
| valign="top" |D2
| valign="top" |1.5
| valign="top" |58
|-
| valign="top" |FCA176
| valign="top" |GGAAACTTGGAAAGCAAAACC
TCCACAGTTGGAGTTCTTAAGG
| valign="top" |A1
| valign="top" |1.5
| valign="top" |58
|-
| valign="top" |FCA045
| valign="top" |TGAAGAAAAGAATCAGGCTGTG
GTATGAGCATCTCTGTGTTCGTG
| valign="top" |D4
| valign="top" |1.5
| valign="top" |58
|-
| valign="top" |FCA723
| valign="top" |TGAAGGCTAAGGCACGATAGA
CGGAAAGATACAGGAAGGGTA
| valign="top" |A1
| valign="top" |1.5
| valign="top" |58
|-
| valign="top" |FCA085
| valign="top" |GGTCCTCACGTTTTCCT
ATGTCTGTATGAGATGCGGT
| valign="top" |E2
| valign="top" |1.5
| valign="top" |58
|-
| valign="top" |FCA084
| valign="top" |TAGGTGAATGTTGGGATTTATGG
AACTGAAGACCAAATTGATGAG
| valign="top" |A1
| valign="top" |1.5
| valign="top" |55
|-
| valign="top" |FCA210
| valign="top" |TGAGCCACCTAGGCACTCTT
AGAAGCATCCAGTGACAATGG
| valign="top" |B4
| valign="top" |1.5
| valign="top" |59
|-
| valign="top" |FCA453
| valign="top" |AATTCTGAGAACAAGCTGAGGG
ATCCTCTATGGCAGGACTTTG
| valign="top" |A1
| valign="top" |1.5
| valign="top" |60
|-
| valign="top" |FCA672
| valign="top" |AAGTTGCTTGCACACACTGC
TCCAAGAGCCTTTTCAGTTAGG
| valign="top" |F2
| valign="top" |1.5
| valign="top" |60
|-
| valign="top" |FCA1056
| valign="top" |GGTGTGAGGGCCTATTCTGA
GGATGTCTCCCTTGACTGGT
| valign="top" |B4
| valign="top" |1.5
| valign="top" |58
|-
| valign="top" |FCA1239
| valign="top" |AAAAGCCCTGACACCCAAG
CTTGACCTTAATTGCTCATTGG
| valign="top" |D2
| valign="top" |1.5
| valign="top" |58
|-
| valign="top" |FCA700
| valign="top" |CCCTTAAAATCGCAGCTCTG
AATCCAAGGAAAACAGGCCT
| valign="top" |B1
| valign="top" |1.5
| valign="top" |58
|-
| valign="top" |FCA742
| valign="top" |TCAATGTCTTGACAACGCATAA
AGGATTGCATGACCAGGAAC
| valign="top" |D4
| valign="top" |1.5
| valign="top" |56
|-
| valign="top" |FCA678
| valign="top" |TCCCTCAGCAATCTCCAGAA
GAGGGAGCTAGCTGAAATTGTT
| valign="top" |A1
| valign="top" |1.5
| valign="top" |56
|-
| valign="top" |FCA096
| valign="top" |CACGCCAAACTCTATGCTGA
CAATGTGCCGTCCAAGAAC
| valign="top" |E2
| valign="top" |1.5
| valign="top" |58
|}
表 A.5   实验猫微卫星位点的扩增条件和染色体分布(续)
{| class="wikitable"
| valign="top" |位点
| valign="top" |引物序列(5´~3´)
| valign="top" |染色体
| valign="top" |Mg2+浓度(mM)
| valign="top" |退火温度(℃)
|-
| valign="top" |FCA075
| valign="top" |ATGCTAATCAGTGGCATTTGG
GAACAAAAATTCCAGACGTGC
| valign="top" |E2
| valign="top" |1.5
| valign="top" |58
|-
| valign="top" |FCA149
| valign="top" |CCTATCAAAGTTCTCACCAAATCA
GTCTCACCATGTGTGGGATG
| valign="top" |B1
| valign="top" |1.5
| valign="top" |58
|-
| valign="top" |FCA220
| valign="top" |CGATGGAAATTGTATCCATGG
GAATGAAGGCAGTCACAAACTG
| valign="top" |F2
| valign="top" |1.5
| valign="top" |58
|-
| valign="top" |FCA229
| valign="top" |CAAACTGACAAGCTTAGAGGGC
GCAGAAGTCCAATCTCAAAGTC
| valign="top" |A1
| valign="top" |1.5
| valign="top" |58
|}
A.2.6       用于检测实验鸡遗传质量的微卫星位点为29个,各微卫星位点的名称、引物序列、等位基因数和等位基因范围按照表A.6的规定执行。
表A.6   实验鸡微卫星位点的引物序列、退火温度、等位基因数及等位基因分布范围
{| class="wikitable"
| valign="top" |位点
| valign="top" |引物序列(5´~3´)
| valign="top" |退火温度(℃)
| valign="top" |最大等位基因数
| valign="top" |等位基因
分布范围
|-
| valign="top" |MCW0029
| valign="top" |GTGGACACCCATTTGTACCCTATG
CATGCAATTCAGGACCGTGCA
| valign="top" |63.8
| valign="top" |8
| valign="top" |139~188
|-
| valign="top" |ADL0293
| valign="top" |GTAATCTAGAAACCCCATCT
ACATACCGCAGTCTTTGTTC
| valign="top" |53.9
| valign="top" |6
| valign="top" |106~120
|-
| valign="top" |ADL0317
| valign="top" |AGTTGGTTTCAGCCATCCAT
CCCAGAGCACACTGTCACTG
| valign="top" |58.5
| valign="top" |8
| valign="top" |177~219
|-
| valign="top" |GCT0016
| valign="top" |TCCAAGGTTCTCCAGTTC
GGCATAAGGATAGCAACAG
| valign="top" |52.2
| valign="top" |6
| valign="top" |111~148
|-
| valign="top" |ADL0304
| valign="top" |GGGGAGGAACTCTGGAAATG
CCTCATGCTTCGTGCTTTTT
| valign="top" |53.9
| valign="top" |7
| valign="top" |138~161
|-
| valign="top" |LEI0074
| valign="top" |GACCTGGTCCTGACATGGGTG
GTTTGCTGATTAGCCATCGCG
| valign="top" |58.5
| valign="top" |6
| valign="top" |221~243
|-
| valign="top" |ADL328
| valign="top" |CACCCATAGCTGTGACTTTG
AAAACCGGAATGTGTAACTG
| valign="top" |53.9
| valign="top" |5
| valign="top" |107~120
|-
| valign="top" |GGANTECl
| valign="top" |GCGGGGCCGTTATCAGAGCA
AGTGCAGGGCGCTCCTGGT
| valign="top" |65.0
| valign="top" |7
| valign="top" |139~194
|-
| valign="top" |LEI0094*
| valign="top" |CAGGATGGCTGTTATGCTTCCA
CACAGTGCAGAGTGGTGCGA
| valign="top" |56.0
| valign="top" |7
| valign="top" |176~211
|-
| valign="top" |MCW0330
| valign="top" |TGGACCTCATCAGTCTGACAG
AATGTTCTCATAGAGTTCCTGC
| valign="top" |58.5
| valign="top" |6
| valign="top" |217~287
|-
| valign="top" |LEI0141
| valign="top" |CGCATTTGATGCATAACACATG
AAGGCAAACTCAGCTGGAACG
| valign="top" |52.2
| valign="top" |5
| valign="top" |221~245
|-
| valign="top" |MCW0087
| valign="top" |ATTTCTGCAGCCAACTTGGAG
CTCAGGCAGTTCTCAAGAACA
| valign="top" |58.5
| valign="top" |9
| valign="top" |268~289
|}
表 A.6   实验鸡微卫星位点的引物序列、退火温度、等位基因数及等位基因分布范围(续)
{| class="wikitable"
| valign="top" |位点
| valign="top" |引物序列(5´~3´)
| valign="top" |退火温度(℃)
| valign="top" |最大等位基因数
| valign="top" |等位基因
分布范围
|-
| valign="top" |MCW0347
| valign="top" |GCTTCCAGATGAGCTCCATGG
CACAGCGCTGCAGCAACTG
| valign="top" |52.0
| valign="top" |3
| valign="top" |121~149
|-
| valign="top" |ADL176
| valign="top" |TTGTGGATTCTGGTGGTAGC
TTCTCCCGTAACACTCGTCA
| valign="top" |58.5
| valign="top" |9
| valign="top" |183~200
|-
| valign="top" |ADL0201
| valign="top" |GCTGAGGATTCAGATAAGAC
AATGGCYGACGTTTCACAGC
| valign="top" |58.5
| valign="top" |7
| valign="top" |111~151
|-
| valign="top" |GGNCAMZO
| valign="top" |GTCACTAGGTTAGCAGCATG
GCTGGATACAGACCTCGATT
| valign="top" |56.0
| valign="top" |1
| valign="top" |234
|-
| valign="top" |GGAVIR
| valign="top" |AGAGATGGTGCACGCAACCT
CGAGCACTTTCTGGCAGAGA
| valign="top" |60.7
| valign="top" |3
| valign="top" |86~89
|-
| valign="top" |MCW0063
| valign="top" |GGCTCCAAAAGCTTGTTCTTAGCT
GAAAACCAGTAAAGCTTCTTAC
| valign="top" |53.9
| valign="top" |8
| valign="top" |116~149
|-
| valign="top" |ADL185
| valign="top" |CATGGCAGCTGACTCCAGAT
AGCGTTACCTGTTCGTTTGC
| valign="top" |58.5
| valign="top" |9
| valign="top" |116~142
|-
| valign="top" |GGMYC
| valign="top" |CGAGGCGCTCTGCGAGTTTA
TGGGGACCTCTGGCTCTGAC
| valign="top" |62.4
| valign="top" |5
| valign="top" |139~151
|-
| valign="top" |LEI0094
| valign="top" |GATCTCACCAGTATGAGCTGC
TCTCACACTGTAACACAGTGC
| valign="top" |53.9
| valign="top" |6
| valign="top" |250~283
|-
| valign="top" |GGVITC
| valign="top" |AGCCATCATTCAGGGCATCT
GATGTCCTGAGTGATGCTCA
| valign="top" |58.5
| valign="top" |2
| valign="top" |86~90
|-
| valign="top" |ADL0292
| valign="top" |CCAAATCAGGCAAAACTTCT
AAATGGCCTAAGGATGAGGA
| valign="top" |58.5
| valign="top" |6
| valign="top" |110~136
|-
| valign="top" |GGVITIIG*
| valign="top" |GGCAGGTTTCTAATGCCTGA
CCCATCGTTTCAACTGTATG
| valign="top" |56.0
| valign="top" |2
| valign="top" |186~189
|-
| valign="top" |ADL166
| valign="top" |TGCCAGCCCGTAATCATAGG
AAGCACCACGACCCAATCTA
| valign="top" |58.5
| valign="top" |6
| valign="top" |131~154
|-
| valign="top" |MCW0014
| valign="top" |AAAATATTGGCTCTAGGAACTGTC
ACCGGAAATGAAGGTAAGACTAGC
| valign="top" |58.5
| valign="top" |9
| valign="top" |172~195
|-
| valign="top" |GGCYMA*
| valign="top" |AGCGAGGCGCTCTGCGAGTT
GGGCACCTCTGGCTCTGACC
| valign="top" |64.6
| valign="top" |5
| valign="top" |140~153
|-
| valign="top" |MCW0402
| valign="top" |ACTGTGCCTAGGACTAGCTG
CCTAAGTCTGGGCTCTTCTG
| valign="top" |56.0
| valign="top" |15
| valign="top" |141~229
|-
| valign="top" |STMSGGHU2-1A
| valign="top" |CTTAATATGTGTGAGGTGGC
GTTCTCACAATTGCATTAGC
| valign="top" |53.9
| valign="top" |2
| valign="top" |235~238
|}
A.2.7       用于检测实验鸭遗传质量的微卫星位点为29个,各微卫星位点的名称、引物序列、等位基因数和等位基因范围按照表A.7的规定执行。
表A.7   实验鸭微卫星位点的引物序列、退火温度、等位基因数及等位基因分布范围
{| class="wikitable"
| valign="top" |位点
| valign="top" |引物序列(5´~3´)
| valign="top" |退火温度(℃)
| valign="top" |最大等位基因数
| valign="top" |等位基因
分布范围
|-
| valign="top" |APL2
| valign="top" |GATTCAACCTTAGCTATCAGTCTCC
CGCTCTTGGCAAATGTCC
| valign="top" |58.5
| valign="top" |4
| valign="top" |115~125
|-
| valign="top" |APL579
| valign="top" |ATTAGAGCAGGAGTTAGGAGAC
GCAAGAAGTGGCTTTTTTC
| valign="top" |55
| valign="top" |7
| valign="top" |118~227
|-
| valign="top" |APH09
| valign="top" |GGATGTTGCCCCACATATTT
TTGCCTTGTTTATGAGCCATTA
| valign="top" |58
| valign="top" |8
| valign="top" |93~188
|-
| valign="top" |APH11
| valign="top" |GGACCTCAGGAAAATCAGTGTA
GCAGGCAGAGCAGGAAATA
| valign="top" |58.5
| valign="top" |2
| valign="top" |183~185
|-
| valign="top" |APH18
| valign="top" |TTCTGGCCTGATAGGTATGAG
GAATTGGGTGGTTCATACTGT
| valign="top" |58
| valign="top" |3
| valign="top" |179~324
|-
| valign="top" |AY258
| valign="top" |ATGTCTGAGTCCTCGGAGC
ACAATAGATTCCAGATGCTGAA
| valign="top" |58.1
| valign="top" |9
| valign="top" |90~161
|-
| valign="top" |AY264
| valign="top" |GCAGACTTTTACTTATGACTC
CTTAGCCCAGTGAAGCATG
| valign="top" |58.1
| valign="top" |11
| valign="top" |112~328
|-
| valign="top" |AY314
| valign="top" |CTCATTCCAATTCCTCTGTA
CAGCATTATTATTTCAGAAGG
| valign="top" |50.3
| valign="top" |3
| valign="top" |135~250
|-
| valign="top" |CAUD001
| valign="top" |ACAGCTTCAGCAGACTTAGA
GCAGAAAGTGTATTAAGGAAG
| valign="top" |55.5
| valign="top" |2
| valign="top" |234~390
|-
| valign="top" |CAUD002
| valign="top" |CTTCGGTGCCTGTCTTAGC
AGCTGCCTGGAGAAGGTCT
| valign="top" |60.8
| valign="top" |4
| valign="top" |175~231
|-
| valign="top" |CAUD004
| valign="top" |TCCACTTGGTAGACCTTGAG
TGGGATTCAGTGAGAAGCCT
| valign="top" |60.8
| valign="top" |3
| valign="top" |162~290
|-
| valign="top" |CAUD005
| valign="top" |CTGGGTTTGGTGGAGCATAA
TACTGGCTGCTTCATTGCTG
| valign="top" |60.8
| valign="top" |3
| valign="top" |180~300
|-
| valign="top" |CAUD006
| valign="top" |ATGGTTCTCTGTAGGCAATC
TTCTGCTTGGGCTCTTGGA
| valign="top" |63.5
| valign="top" |8
| valign="top" |183~248
|-
| valign="top" |CAUD007
| valign="top" |ACTTCTCTTGTAGGCATGTCA
CACCTGTTGCTCCTGCTGT
| valign="top" |60.8
| valign="top" |6
| valign="top" |100~208
|-
| valign="top" |CAUD010
| valign="top" |GGATGTGTTTTTCATTATTGAT
AGAGGCATAAATACTCAGTG
| valign="top" |50.3
| valign="top" |9
| valign="top" |180~300
|-
| valign="top" |CAUD011
| valign="top" |TGCTATCCACCCAATAAGTG
CAAAGTTAGCTGGTATCTGC
| valign="top" |50.3
| valign="top" |6
| valign="top" |137~222
|-
| valign="top" |CAUD012
| valign="top" |ATTGCCTTTCAGTGGAGTTTC
CGGCTCTAAACACATGAATG
| valign="top" |63.5
| valign="top" |9
| valign="top" |182~286
|-
| valign="top" |CAUD014
| valign="top" |CACAACTGACGGCACAAAGT
CTGAGTTTTTCCCGCCTCTA
| valign="top" |58.1
| valign="top" |3
| valign="top" |136~200
|-
| valign="top" |CAUD026
| valign="top" |ACGTCACATCACCCCACAG
CTTTGCCTCTGGTGAGGTTC
| valign="top" |60.8
| valign="top" |9
| valign="top" |134~196
|}
表 A.7   实验鸭微卫星位点的引物序列、退火温度、等位基因数及等位基因分布范围(续)
{| class="wikitable"
| valign="top" |位点
| valign="top" |引物序列(5´~3´)
| valign="top" |退火温度(℃)
| valign="top" |最大等位基因数
| valign="top" |等位基因
分布范围
|-
| valign="top" |CAUD027
| valign="top" |AGAAGGCAGGCAAATCAGAG
TCCACTCATAAAAACACCCACA
| valign="top" |66
| valign="top" |5
| valign="top" |100~180
|-
| valign="top" |CAUD028
| valign="top" |TACACCCAAGTTTATTCTGAG
ACTCTCCAGGGCACTAGG
| valign="top" |55.5
| valign="top" |8
| valign="top" |153~220
|-
| valign="top" |CAUD031
| valign="top" |AGCATCTGGACTTTTTCTGGA
CACCCCAGGCTCTGAGATAA
| valign="top" |51.4
| valign="top" |10
| valign="top" |140~187
|-
| valign="top" |CAUD032
| valign="top" |GAAACCAACTGAAAACGGGC
CCTCCTGCGTCCCAATAAG
| valign="top" |58.1
| valign="top" |9
| valign="top" |96~206
|-
| valign="top" |CAUD034
| valign="top" |TACTGCATATCACTAGAGGA
TAGGCATACTCGGGTTTAG
| valign="top" |55.5
| valign="top" |9
| valign="top" |160~296
|-
| valign="top" |CAUD035
| valign="top" |GTGCCTAACCCTGATGGATG
CTTATCAGATGGGGCTCGGA
| valign="top" |63.5
| valign="top" |7
| valign="top" |174~282
|-
| valign="top" |CMO211
| valign="top" |GGATGTTGCCCCACATATTT
TTGCCTTGTTTATGAGCCATT
| valign="top" |55
| valign="top" |7
| valign="top" |112~205
|-
| valign="top" |CMO212
| valign="top" |CTCCACTAGAACACAGACATT
CATCTTTGGCATTTTGAAG
| valign="top" |58
| valign="top" |3
| valign="top" |186~272
|}
A.2.8       用于检测实验鹅遗传质量的微卫星位点为14个,各微卫星位点的名称、引物序列、等位基因数和等位基因范围按照表A.8的规定执行。
表A.8   实验鹅微卫星位点的引物序列、退火温度、等位基因数及等位基因分布范围
{| class="wikitable"
| valign="top" |位点
| valign="top" |引物序列(5´~3´)
| valign="top" |退火温度(℃)
| valign="top" |最大等位基因数
| valign="top" |等位基因
分布范围
|-
| valign="top" |Ans02
| valign="top" |TTCTGTGCAGGGGCGAGTT
AGGGAACCGATCACGACATG
| valign="top" |58
| valign="top" |7
| valign="top" |202~230
|-
| valign="top" |Ans07
| valign="top" |GACTGAGGAACTACAATTGACT
ACAAAGACTACTACTGCCAAG
| valign="top" |58
| valign="top" |6
| valign="top" |236~246
|-
| valign="top" |Ans02
| valign="top" |TTCTGTGCAGGGGCGAGTT
AGGGAACCGATCACGACATG
| valign="top" |58
| valign="top" |7
| valign="top" |202~230
|-
| valign="top" |Ans07
| valign="top" |GACTGAGGAACTACAATTGACT
ACAAAGACTACTACTGCCAAG
| valign="top" |58
| valign="top" |6
| valign="top" |236~246
|-
| valign="top" |Ans17
| valign="top" |ACAAATAACTGGTTCTAAGCAC
AGAGGACTTCTATTCATAAATA
| valign="top" |54
| valign="top" |4
| valign="top" |111~123
|-
| valign="top" |Ans18
| valign="top" |GTGTTCTCTGTTTATGATATTAC
AACAGAATTTGCTTGAAACTGC
| valign="top" |58
| valign="top" |3
| valign="top" |229~237
|-
| valign="top" |CKW47
| valign="top" |AACTTCTGCACCTAAAAACTGTCA
TGCTGAGGTAACAGGAATTAAAA
| valign="top" |62
| valign="top" |6
| valign="top" |211~221
|-
| valign="top" |APH13
| valign="top" |CAACGAGTGACAATGATAAAA
CAATGATCTCACTCCCAATAG
| valign="top" |55
| valign="top" |4
| valign="top" |163~178
|}
表 A.8   实验鹅微卫星位点的引物序列、退火温度、等位基因数及等位基因分布范围(续)
{| class="wikitable"
| valign="top" |位点
| valign="top" |引物序列(5´~3´)
| valign="top" |退火温度(℃)
| valign="top" |最大等位基因数
| valign="top" |等位基因
分布范围
|-
| valign="top" |APH20
| valign="top" |ACCAGCCTAGCAAGCACTGT
GAGGCTTTAGGAGAGATTGAAAAA
| valign="top" |60
| valign="top" |13
| valign="top" |135~155
|-
| valign="top" |Bca μ5
| valign="top" |AGTGTTTCTTTCATCTCCACAAGC
AGACCACAATCGGACCACATATTC
| valign="top" |62
| valign="top" |4
| valign="top" |197~201
|-
| valign="top" |Bca μ8
| valign="top" |CCCAAGACTCACAAAACCAGAAAT
ATGAAAGAAGAGTTAAACGTGTGCAA
| valign="top" |58
| valign="top" |7
| valign="top" |155~164
|-
| valign="top" |TTUCG1
| valign="top" |CCCTGCTGGTATACCTGA
GTGTCTACACAACAGC
| valign="top" |58
| valign="top" |3
| valign="top" |113~115
|-
| valign="top" |G-Ans25
| valign="top" |CACTTATTAATGGCACTTGAAA
GTTCTCTTGTCACAACTGGA
| valign="top" |62
| valign="top" |4
| valign="top" |224~270
|-
| valign="top" |G-Hhiμ1b¶
| valign="top" |ATCAAAGGCACAATGTGAAAT
AGTAAGGGGGCTTCCACC
| valign="top" |60
| valign="top" |6
| valign="top" |163~221
|-
| valign="top" |G-Bcaμ7
| valign="top" |TAGTTTCTATTTGCACCCAATGGAG
TAGTTTCTATTTGCACCCAATGGAG
| valign="top" |60
| valign="top" |6
| valign="top" |164~174
|-
| valign="top" |G-CAUD006
| valign="top" |ATGGTTCTCTGTAGGCAATC
TTCTGCTTGGGCTCTTGG
| valign="top" |56
| valign="top" |13
| valign="top" |152~210
|}
A.2.9       用于检测实验鸽遗传质量的微卫星位点为16个,各微卫星位点的名称、引物序列、等位基因数和等位基因范围按照表A.9的规定执行。
表A.9   实验鸽微卫星位点的引物序列、退火温度、等位基因数及等位基因分布范围
{| class="wikitable"
| valign="top" |位点名称
| valign="top" |引物序列(5′~3′)
| valign="top" |退火温度(℃)
| valign="top" |最大等位基因数
| valign="top" |等位基因
分布范围
|-
| valign="top" |UU-Cli02
| valign="top" |TGGGCAAGGTACACTTTTAGGT
CTTTATGCTCCCCCTTGAGAT
| valign="top" |61
| valign="top" |4
| valign="top" |158~170
|-
| valign="top" |UU-Cli06
| valign="top" |TTTGAAAAACATGGATTGTGC
AATTTGCAGAGGGTGAGTGG
| valign="top" |56
| valign="top" |4
| valign="top" |140~145
|-
| valign="top" |PG5
| valign="top" |GTTCTTGGTGTTGCATGGATGC
AGTTACGAAATGATTGCCAGAAG
| valign="top" |59
| valign="top" |2
| valign="top" |262~266
|-
| valign="top" |C26L9(1265223)
| valign="top" |CAAAGCTGCTGACGTGAATCAA
AGAGACGCTCCATGCAAAAG
| valign="top" |59
| valign="top" |4
| valign="top" |467~472
|-
| valign="top" |UU-Cli14
| valign="top" |CAGAACGTTTTGTTCTGTTTGG
TCTTGCTGCAGTCTTCATCC
| valign="top" |58
| valign="top" |5
| valign="top" |265~292
|-
| valign="top" |C12L1(532572)
| valign="top" |GTTGTTTGGCTGAGTGGACG
TCAACCAGGGGAATTGGCAG
| valign="top" |62
| valign="top" |3
| valign="top" |126~136
|-
| valign="top" |C12L4(906353)
| valign="top" |GCTGCTGTCTTCTTCATTGGG
TTAAAACCTCCCGTCTCCCTG
| valign="top" |60
| valign="top" |5
| valign="top" |210~250
|-
| valign="top" |CliµD11
| valign="top" |CCAATCCCAAAGAGGATTAT
ACTGTCCTATGGCTGAAGTG
| valign="top" |58
| valign="top" |4
| valign="top" |78~98
|}
表 A.9   实验鸽微卫星位点的引物序列、退火温度、等位基因数及等位基因分布范围(续)
{| class="wikitable"
| valign="top" |位点名称
| valign="top" |引物序列(5′~3′)
| valign="top" |退火温度(℃)
| valign="top" |最大等位基因数
| valign="top" |等位基因
分布范围
|-
| valign="top" |C26L10(1404758)
| valign="top" |GCTGTCAGGTATCAGCCACAA
TCAGACCCACGAAAGCTGTAA
| valign="top" |59
| valign="top" |7
| valign="top" |211~226
|-
| valign="top" |C26L4(568923)
| valign="top" |CAACCCCATGTGGGTGAGAC
CACCACCACGTGGGACATC
| valign="top" |63
| valign="top" |6
| valign="top" |357~432
|-
| valign="top" |PG4
| valign="top" |CCCATCTCCTGCCTGATGC
CACAGCAGGATGCTGCCTGC
| valign="top" |64
| valign="top" |4
| valign="top" |136~170
|-
| valign="top" |UU-Cli12
| valign="top" |CGCCAGACTGTATTGTGAGC
AGCATGGCTGTTCTTTGAGG
| valign="top" |61
| valign="top" |9
| valign="top" |231~265
|-
| valign="top" |CliμT47
| valign="top" |ATGTGTGTTTGTGCATGAAG
ATGAAAGCCTGTTAGTGGAA
| valign="top" |56
| valign="top" |5
| valign="top" |183~214
|-
| valign="top" |CliμD32
| valign="top" |GAGCCATTTCAGTGAGTGACA
GTTTGCAGGAGCGTGTAGAGAAGT
| valign="top" |60
| valign="top" |6
| valign="top" |136~158
|-
| valign="top" |UU-Cli07
| valign="top" |GCTGCCTGTTACTACCTGAGC
CTGGCCATGAAATGAACTCC
| valign="top" |61
| valign="top" |4
| valign="top" |277~310
|-
| valign="top" |C26L1(20390)
| valign="top" |AGGAGCCTACACTGGGTTTTC
TGTAGCTCTGCAATCAGCCT
| valign="top" |60
| valign="top" |4
| valign="top" |250~268
|}
A.2.10       用于检测实验斑马鱼和实验剑尾鱼遗传质量的微卫星位点为5个以上,常用实验斑马鱼品系微卫星分子标记的遗传特征按照表A.10的规定执行。
表A.10   常用实验斑马鱼微卫星分子标记的遗传特征
{| class="wikitable"
| rowspan="2" valign="top" |引物名称
| rowspan="2" valign="top" |位点
| rowspan="2" valign="top" |引物序列(5’~3’)
| colspan="5" valign="top" |品系片段长度(bp)
|-
| valign="top" |AB
| valign="top" |TU
| valign="top" |LF
| valign="top" |WIK
| valign="top" |本地短尾
|-
| valign="top" |
Z24
| valign="top" |
LG15
| valign="top" |CACCTTCACGGTGAGTAGCA
GTGGAATGGTGTGACTAATGTCA
| valign="top" |
150
| valign="top" |
150
| valign="top" |
150
| valign="top" |
| valign="top" |
|-
| valign="top" |
Z928
| valign="top" |
LG18
| valign="top" |CAGTCCAGGCTGAACATTCA
ACACCTTCGGCAGTTTTCAC
| valign="top" |
134,94
| valign="top" |
134,126
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |
|-
| valign="top" |
Z1059
| valign="top" |
LG7
| valign="top" |AACAGGTGACAGAGCACACG
GGGAGAGGGCAGGACAATAT
| valign="top" |
150/122
| valign="top" |
150/122
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |
|-
| valign="top" |
Z1265
| valign="top" |
LG6
| valign="top" |ATATGTGCTGCTCATGATGAGT
AACAGACGAAGGGTGAAGGA
| valign="top" |
90~110bp
| valign="top" |
90~110bp
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |
|-
| valign="top" |
Z1637
| valign="top" |
LG8
| valign="top" |GGCTTTTGGATGAAGGTTGAGC
GGAATCACAATGGCAGCAGA
| valign="top" |
143,105
| valign="top" |
133,103
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |
|-
| valign="top" |
Z3725
| valign="top" |
LG3
| valign="top" |ACTAAATCGCACTTCAGCAGCG
GGTGTCCTCACATCAGCTGCA
| valign="top" |262,256,
248
| valign="top" |
248
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |
|-
| valign="top" |
Z3782
| valign="top" |
LG19
| valign="top" |AATTCTGGGGGGTAATTCTGGC
AAGGGGGCTAAACCTTCAACTG
| valign="top" |200,90
| valign="top" |170
| valign="top" |120
| valign="top" |90
| valign="top" |
|}
表 A.10   常用实验斑马鱼微卫星分子标记的遗传特征(续)
{| class="wikitable"
| rowspan="2" valign="top" |引物名称
| rowspan="2" valign="top" |位点
| rowspan="2" valign="top" |引物序列(5’~3’)
| colspan="5" valign="top" |品系片段长度(bp)
|-
| valign="top" |AB
| valign="top" |TU
| valign="top" |LF
| valign="top" |WIK
| valign="top" |本地短尾
|-
| valign="top" |
Z4299
| valign="top" |
LG5
| valign="top" |AGGAATGCGCTATGGGACGA CACATCTGCCACTGAACCGG
| valign="top" |370,260,
230
| valign="top" |
260,230
| valign="top" |280,260
| valign="top" |300,
260,
190
| valign="top" |
|-
| valign="top" |
Z5223
| valign="top" |
LG15
| valign="top" |AACAGAGCCGATCTGCCACC
AGCACAGCGGAGGAAATAAAGC
| valign="top" |
178,150
| valign="top" |
178,150
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |
|-
| valign="top" |
Z9384
| valign="top" |
LG19
| valign="top" |CCGACTGGAGAAGACCTGAG AGCATAATCAGACAACCGGG
| valign="top" |134,177,
190,134,
177,190
| valign="top" |
| valign="top" |134 ,
177,190
134 ,
177,190
| valign="top" |
| valign="top" |134 , 177 ,
190 , 134 ,
177,190
|}
A.2.11       用于检测封闭群实验树鼩遗传质量的微卫星位点为10个,各微卫星位点的名称、引物序列、P CR反应的退火温度、镁离子浓度按照表A.11的规定执行。
表A.11   实验树鼩微卫星位点的名称、引物序列、PCR 反应的退火温度、镁离子浓度
{| class="wikitable"
| valign="top" |位点
| valign="top" |引物序列(5´~3´)
| valign="top" |等位基因分布范围
(bp)
| valign="top" |等位基因数
| valign="top" |退火温度
(℃)
| valign="top" |Mg<sup>2+</sup>浓度
(mM)
|-
| valign="top" |TBC16
| valign="top" |CCATCCTGACTACTGCTTAC
AGGGCTACTTTATAGGTTTC
| valign="top" |135-167
| valign="top" |7
| valign="top" |51
| valign="top" |1.5
|-
| valign="top" |TBC19
| valign="top" |AGGGAACCAAATGAACAA
GTCACCGAAGTCACAACC
| valign="top" |196-208
| valign="top" |6
| valign="top" |58
| valign="top" |1.5
|-
| valign="top" |TBC23
| valign="top" |GCTTTGTCACTTTCCTTCCCTA
TGCGCTCGTGGCTATTTT
| valign="top" |166-262
| valign="top" |16
| valign="top" |55
| valign="top" |2.0
|-
| valign="top" |TBC25
| valign="top" |TGTCTCCCTGGTCATATT
GTGCTCTTCTCAGCGTTT
| valign="top" |386-426
| valign="top" |8
| valign="top" |59
| valign="top" |2.0
|-
| valign="top" |TBC26
| valign="top" |CATCCCTGAATCCAAGCC
CACCAGCAAGGTAACTCC
| valign="top" |206-236
| valign="top" |6
| valign="top" |55
| valign="top" |1.5
|-
| valign="top" |TBC27
| valign="top" |GTTAAGGCACTGGACATT
GTGAACCCACAAATAATCTA
| valign="top" |220-246
| valign="top" |3
| valign="top" |57
| valign="top" |1.5
|-
| valign="top" |TB6
| valign="top" |AGACAGAATGCAAGAAATCAC
ATGTGCAATGTAATAGTTCCAG
| valign="top" |418-432
| valign="top" |4
| valign="top" |56
| valign="top" |1.5
|-
| valign="top" |TG4
| valign="top" |TGAAAACTGGCAATTCATATGC
CAATCCTTTTTCGTTAGTTTTGTG
| valign="top" |134-152
| valign="top" |4
| valign="top" |57
| valign="top" |1.5
|-
| valign="top" |JS22
| valign="top" |CAATGTCCTGGTGGTTATGG
GAAGTGGTCACTCTGCAATCC
| valign="top" |149-168
| valign="top" |7
| valign="top" |58
| valign="top" |1.5
|-
| valign="top" |JS188
| valign="top" |ACACACACAAAACTCATTTTATCC
TCTACACGAATGTGCCAACC
| valign="top" |182-190
| valign="top" |5
| valign="top" |58
| valign="top" |1.5
|}
A.3     PCR扩增
A.3.1       PCR扩增的体系
PCR总反应体积为15μL,其中含10×PCR buffer:1.5μL,上下游引物(100 pmol/μL) 各1μL, 4×dNTP 100 μmol/L:1μL ,Taq 酶1U:1μL ,50 ng~100 ng 基因组DNA:1μL ,纯水(ddH2O) :8.5μL。 PCR反应程序为:95 ℃预变性,4 min;94 ℃变性,30 s;退火温度(各位点序列、PCR反应条件见表 A.1~A.10),30 s;72 ℃延伸,30 s;35个循环;72 ℃继续延伸7 min;扩增产物4 ℃保存。
A.3.2       PCR产物的凝胶检测
PCR产物经1.5%的琼脂糖凝胶电泳以及凝胶成像系统拍照。
A.3.3       扩增产物的STR扫描
扩增产物经过琼脂糖凝胶电泳检测确保扩增出目的片断后,选择分别以FAM、HEX、TAMRA标记的三
个位点的扩增产物,以1:3:5体积比混合,取1μL上样进行STR扫描。
A.4     STR扫描结果的判读与统计分析
扫描结果可出现两种波形:一种为纯合基因型,只有一个主波;另一种为杂合基因型,有两个主波。
由群体遗传分析软件读出每个样本在每个微卫星位点的扩增片断大小。每个位点的等位基因根据扩
增片断从小到大顺序排列记录为a,b,c,d等。
A.4.1       数据统计分析
将所有样本的每个微卫星位点的基因型以ab,bb等形式运用软件的数据文件,计算样品在各微卫星位点上的基因频率、平均观察等位基因数、平均有效等位基因数(Ne)、香隆指数、平均杂合度(H)等。
A.5     实验结果
A.5.1       实验种群
A.5.1.1         实验狨猴和实验猫
实验狨猴和实验猫采用群体平衡状态方法进行评价。按照哈代-温伯格(Hardy-Weiberg)定律,根据各位点的等位基因数计算封闭群的基因频率,进行卡方(chi-square  test)检验。当群体达到平衡状态,该群体判为合格,否则判为不合格。
A.5.1.2         实验雪貂
实验雪貂采用群体平均杂合度进行评价,当群体平均杂合度在0.5~0.7时,该群体判为合格,否则
判为不合格。
A.5.2       封闭群
封闭群实验长爪沙鼠、实验鸡、实验鸭、实验鹅、实验鸽、实验小型猪、实验鱼(斑马鱼和剑尾鱼)和实验树鼩采用平均杂合度进行评价,当群体平均杂合度在0.5~0.7时,该群体判为合格,否则判为不合格。
A.5.3       近交系
A.5.3.1         实验小型猪
所有样品检测位点的等位基因都符合品系的特征,按照表A.12~A.14的规定执行,没有新的等位基因出现为合格实验小型猪近交系,否则判为不合格。
表A.12   近交系五指山小型猪近交系培育过程中遗传质量控制的微卫星座位及优势等位基因
{| class="wikitable"
| valign="top" |位点
| colspan="5" valign="top" |等位基因及频率
| valign="top" |频率合计
|-
| rowspan="2" valign="top" |CGA
| valign="top" |片段
| valign="top" |189
| valign="top" |199
| valign="top" |203
| valign="top" |293
| valign="top" |
|-
| valign="top" |频率
| valign="top" |0.023
| valign="top" |0.872
| valign="top" |0.023
| valign="top" |0.081
| valign="top" |1.000
|-
| rowspan="2" valign="top" |SW769
| valign="top" |片段
| valign="top" |105
| valign="top" |129
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |
|-
| valign="top" |频率
| valign="top" |0.093
| valign="top" |0.907
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |0.97
|-
| rowspan="2" valign="top" |SW857
| valign="top" |片段
| valign="top" |150
| valign="top" |158
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |
|-
| valign="top" |频率
| valign="top" |0.163
| valign="top" |0.837
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |1
|-
| rowspan="2" valign="top" |S0355
| valign="top" |片段
| valign="top" |0.75
| valign="top" |0.138
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |
|-
| valign="top" |频率
| valign="top" |106
| valign="top" |114
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |0.888
|-
| rowspan="2" valign="top" |SW72
| valign="top" |片段
| valign="top" |106
| valign="top" |114
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |
|-
| valign="top" |频率
| valign="top" |0.588
| valign="top" |0.238
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |0.825
|-
| rowspan="2" valign="top" |S0090
| valign="top" |片段
| valign="top" |241
| valign="top" |247
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |
|-
| valign="top" |频率
| valign="top" |0.756
| valign="top" |0.012
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |0.756
|-
| rowspan="2" valign="top" |S0218
| valign="top" |片段
| valign="top" |173
| valign="top" |179
| valign="top" |181
| valign="top" |
| valign="top" |
|-
| valign="top" |频率
| valign="top" |0.012
| valign="top" |0.547
| valign="top" |0.419
| valign="top" |
| valign="top" |0.547
|-
| rowspan="2" valign="top" |SW24
| valign="top" |片段
| valign="top" |104
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |
|-
| valign="top" |频率
| valign="top" |0.631
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |0.631
|}
表A.13   近交系广西巴马小型猪和培育过程中遗传质量控制的微卫星座位及优势等位基因
{| class="wikitable"
| valign="top" |位点
| colspan="5" valign="top" |等位基因及频率
| valign="top" |频率合计
|-
| rowspan="2" valign="top" |CGA
| valign="top" |片段
| valign="top" |271
| valign="top" |277
| valign="top" |297
| valign="top" |
| valign="top" |
|-
| valign="top" |频率
| valign="top" |0.49
| valign="top" |0.281
| valign="top" |0.229
| valign="top" |
| valign="top" |1
|-
| rowspan="2" valign="top" |SW769
| valign="top" |片段
| valign="top" |123
| valign="top" |127
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |
|-
| valign="top" |频率
| valign="top" |0.194
| valign="top" |0.806
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |1
|-
| rowspan="2" valign="top" |SW857
| valign="top" |片段
| valign="top" |146
| valign="top" |154
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |
|-
| valign="top" |频率
| valign="top" |0.146
| valign="top" |0.573
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |0.719
|-
| rowspan="2" valign="top" |S0005
| valign="top" |片段
| valign="top" |216
| valign="top" |226
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |
|-
| valign="top" |频率
| valign="top" |0.223
| valign="top" |0.66
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |0.883
|-
| rowspan="2" valign="top" |SW240
| valign="top" |片段
| valign="top" |94
| valign="top" |98
| valign="top" |104
| valign="top" |
| valign="top" |
|-
| valign="top" |频率
| valign="top" |0.531
| valign="top" |0.333
| valign="top" |0.115
| valign="top" |
| valign="top" |0.979
|-
| rowspan="2" valign="top" |S0355
| valign="top" |片段
| valign="top" |258
| valign="top" |260
| valign="top" |262
| valign="top" |
| valign="top" |
|-
| valign="top" |频率
| valign="top" |0.083
| valign="top" |0.427
| valign="top" |0.427
| valign="top" |
| valign="top" |0.854
|-
| rowspan="2" valign="top" |SW72
| valign="top" |片段
| valign="top" |110
| valign="top" |120
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |
|-
| valign="top" |频率
| valign="top" |0.698
| valign="top" |0.083
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |0.781
|-
| rowspan="2" valign="top" |S0090
| valign="top" |片段
| valign="top" |241
| valign="top" |243
| valign="top" |247
| valign="top" |249
| valign="top" |
|-
| valign="top" |频率
| valign="top" |0.032
| valign="top" |0.117
| valign="top" |0.489
| valign="top" |0.117
| valign="top" |0.606
|}
表 A.13   近交系广西巴马小型猪和培育过程中遗传质量控制的微卫星座位及优势等位基因(续)
{| class="wikitable"
| valign="top" |位点
| colspan="5" valign="top" |等位基因及频率
| valign="top" |频率合计
|-
| rowspan="2" valign="top" |S0218
| valign="top" |片段
| valign="top" |167
| valign="top" |173
| valign="top" |179
| valign="top" |187
| valign="top" |
|-
| valign="top" |频率
| valign="top" |0.115
| valign="top" |0.74
| valign="top" |0.125
| valign="top" |0.021
| valign="top" |0.854
|-
| rowspan="2" valign="top" |SW24
| valign="top" |片段
| valign="top" |102
| valign="top" |104
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |
|-
| valign="top" |频率
| valign="top" |0.75
| valign="top" |0.021
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |0.75
|}
表A.14   近交系贵州小型猪培育过程中遗传质量控制的微卫星座位及优势等位基因
{| class="wikitable"
| valign="top" |位点
| colspan="7" valign="top" |等位基因及频率
| valign="top" |频率合计
|-
| rowspan="2" valign="top" |CGA
| valign="top" |片段
| valign="top" |271
| valign="top" |283
| valign="top" |285
| valign="top" |305
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |
|-
| valign="top" |频率
| valign="top" |0.011
| valign="top" |0.136
| valign="top" |0.364
| valign="top" |0.295
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |0.795
|-
| rowspan="2" valign="top" |SW769
| valign="top" |片段
| valign="top" |105
| valign="top" |121
| valign="top" |129
| valign="top" |133
| valign="top" |139
| valign="top" |145
| valign="top" |
|-
| valign="top" |频率
| valign="top" |0.291
| valign="top" |0.267
| valign="top" |0.093
| valign="top" |0.151
| valign="top" |0.081
| valign="top" |0.116
| valign="top" |0.907
|-
| rowspan="2" valign="top" |SW857
| valign="top" |片段
| valign="top" |156
| valign="top" |160
| valign="top" |166
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |
|-
| valign="top" |频率
| valign="top" |0.167
| valign="top" |0.452
| valign="top" |0.202
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |0.821
|-
| rowspan="2" valign="top" |S0005
| valign="top" |片段
| valign="top" |202
| valign="top" |204
| valign="top" |214
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |
|-
| valign="top" |频率
| valign="top" |0.558
| valign="top" |0.244
| valign="top" |0.186
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |0.988
|-
| rowspan="2" valign="top" |SW240
| valign="top" |片段
| valign="top" |96
| valign="top" |102
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |
|-
| valign="top" |频率
| valign="top" |0.227
| valign="top" |0.182
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |0.409
|-
| rowspan="2" valign="top" |S0355
| valign="top" |片段
| valign="top" |252
| valign="top" |254
| valign="top" |272
| valign="top" |274
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |
|-
| valign="top" |频率
| valign="top" |0.183
| valign="top" |0.098
| valign="top" |0.11
| valign="top" |0.341
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |0.732
|-
| rowspan="2" valign="top" |SW72
| valign="top" |片段
| valign="top" |102
| valign="top" |
| valign="top" |112
| valign="top" |118
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |
|-
| valign="top" |频率
| valign="top" |0.17
| valign="top" |
| valign="top" |0.625
| valign="top" |0.045
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |0.841
|-
| rowspan="2" valign="top" |S0090
| valign="top" |片段
| valign="top" |247
| valign="top" |249
| valign="top" |253
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |
|-
| valign="top" |频率
| valign="top" |0.045
| valign="top" |0.58
| valign="top" |0.375
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |0.955
|-
| rowspan="2" valign="top" |S0218
| valign="top" |片段
| valign="top" |181
| valign="top" |187
| valign="top" |195
| valign="top" |197
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |
|-
| valign="top" |频率
| valign="top" |0.151
| valign="top" |0.186
| valign="top" |0.023
| valign="top" |0.5
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |0.709
|-
| rowspan="2" valign="top" |SW24
| valign="top" |片段
| valign="top" |100
| valign="top" |104
| valign="top" |108
| valign="top" |112
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |
|-
| valign="top" |频率
| valign="top" |0.114
| valign="top" |0.114
| valign="top" |0.216
| valign="top" |0.136
| valign="top" |
| valign="top" |
| valign="top" |0.466
|}
A.5.3.2         实验鱼
近交系实验鱼(斑马鱼和剑尾鱼)检测结果判定按照表A.15的规定执行。
表A.15   近交系实验鱼检测结果判定
{| class="wikitable"
| valign="top" |检测结果
| valign="top" |判          断
| valign="top" |处          理
|-
| valign="top" |与标准参考位点完全一致
| valign="top" |未发现遗传变异,遗传质量合格
| valign="top" |
|-
| valign="top" |
有一个位点的分子与标准参考位点不一致
| valign="top" |
可疑
| valign="top" |增加检测位点数目和增加检测方法后重检,确实只有一个标记基因改变可命
名为同源突变系
|-
| valign="top" |两个或两个以上位点的标记基因与标准参
考位点不一致
| valign="top" |不合格
| valign="top" |淘汰,重新引种
|}
A.6     结果报告
根据判定结果对实验动物群体出具遗传质量检测报告。 
附   录   B
(规范性)
实验斑马鱼 SNP 遗传标记的检测方法
B.1     基因组DNA的提取
基因组DNA提取方法按照NY/T 1673的规定执行。
B.2     PCR扩增
按照附录A中A.3.1的方法进行。
B.3     SNP标记的检测
取10  μLPCR产物用25  μL的水稀释,并用枪头吹打混匀。然后取1  μL为模板,用表B.1中的引物
进行PCR扩增和产物测序,最后使用PolyPhred 程序软件分析SNP标记的测定结果。
B.4     SNP分子标记的选择及特征
选择位于近交系斑马鱼25对染色体、剑尾鱼24对染色体上的10个以上位点,作为遗传检测的SNP标记。SNP分子标记的名称及常用近交系斑马鱼的SNP分子标记的特征符合表B.1的要求。
表 B.1 常用实验斑马鱼品系 SNP 分子标记位点
{| class="wikitable"
| valign="top" |染色体:位点
| valign="top" |SNP ID
| valign="top" |AB
| valign="top" |TU
| valign="top" |引物(5´~3´)
| valign="top" |dbSNP ID
|-
| valign="top" |
01:018595529
| valign="top" |
DS043503-5
| valign="top" |
T
| valign="top" |
C
| valign="top" |GGCGATTCCTACAATTCTTC GAAAGTCCTGTGTTGAAGGTG
| valign="top" |ss49838906
|-
| valign="top" |
01:049159399
| valign="top" |
DS036502-3
| valign="top" |
G
| valign="top" |
C
| valign="top" |GGCACATCGTCATATAATGC ACAATACTGGAATGACACTGG
| valign="top" |ss49838640
|-
| valign="top" |
02:025012321
| valign="top" |
DS042554
| valign="top" |
A
| valign="top" |
G
| valign="top" |GAAGTCCATGTTGGCATCTAC AGTGTTGAGAAACGGTCAGG
| valign="top" |ss49824928
|-
| valign="top" |
02:027720831
| valign="top" |
DS040180-3
| valign="top" |
T
| valign="top" |
G
| valign="top" |AACACTGGCACGTACACAAG GGGAATCGTGAACTCGTAAC
| valign="top" |ss49838788
|-
| valign="top" |
03:048073042
| valign="top" |
DS032197-8
| valign="top" |
A
| valign="top" |
T
| valign="top" |TCATTGTAATAGCAGTAATGACG TGCAATGTTTGTTTCAGACC
| valign="top" |ss49838454
|-
| valign="top" |
03:048073049
| valign="top" |
DS032197-7
| valign="top" |
G
| valign="top" |
A
| valign="top" |TCATTGTAATAGCAGTAATGACG TGCAATGTTTGTTTCAGACC
| valign="top" |ss49838453
|}
表 B.1 常用实验斑马鱼品系 SNP 分子标记位点(续)
{| class="wikitable"
| valign="top" |染色体:位点
| valign="top" |SNP ID
| valign="top" |AB
| valign="top" |TU
| valign="top" |引物(5´~3´)
| valign="top" |dbSNP ID
|-
| valign="top" |
04:003254191
| valign="top" |
DS036864-20
| valign="top" |
T
| valign="top" |
G
| valign="top" |CTGCTGTTACTGGGTCAGTG ACTGCATGATAATGCCAAAC
| valign="top" |ss49838683
|-
| valign="top" |04:003254203
| valign="top" |DS036864-19
| valign="top" |G
| valign="top" |A
| valign="top" |CTGCTGTTACTGGGTCAGTG
ACTGCATGATAATGCCAAAC
| valign="top" |ss49838682
|-
| valign="top" |05:015736030
| valign="top" |DS002778-2
| valign="top" |T
| valign="top" |C
| valign="top" |AAACGTGGCAGAAATGAAAC
CCCATTTGTAGAAGAATCCAG
| valign="top" |ss49837738
|-
| valign="top" |05:025044903
| valign="top" |DS009184-1
| valign="top" |T
| valign="top" |C
| valign="top" |TTGCATTAGAGCCTTATCCTG
TGTTCTTATGCTCTGTGACTG
| valign="top" |ss49837839
|-
| valign="top" |06:001111132
| valign="top" |DS014169-1
| valign="top" |T
| valign="top" |G
| valign="top" |GAGCAGCGATACTCACACAG
TTCACTAGGTAAGACTCTTGAAGC
| valign="top" |ss49837929
|-
| valign="top" |06:024875905
| valign="top" |DS032220-5
| valign="top" |C
| valign="top" |T
| valign="top" |TCTCTTTAATGTTGGACTGCTG
CCTTTAATCCATAGCCTTAGC
| valign="top" |ss49838470
|-
| valign="top" |07:018909158
| valign="top" |DS033959
| valign="top" |C
| valign="top" |T
| valign="top" |GACACATACCTGGCACTCG
TCTCCTGAGAAGGATTCCAC
| valign="top" |ss49816684
|-
| valign="top" |07:019711091
| valign="top" |DS023709
| valign="top" |C
| valign="top" |T
| valign="top" |CAGTTGAGAAGGGAGAAACG
GCTGTTGGGTTGACTTGC
| valign="top" |ss49806847
|-
| valign="top" |08:010818674
| valign="top" |DS023589-1
| valign="top" |G
| valign="top" |A
| valign="top" |AGGAAAGACACCATCACTGAG
CTTTAGGCGCAATAACAAGG
| valign="top" |ss49838126
|-
| valign="top" |08:026974745
| valign="top" |DS030842-1
| valign="top" |A
| valign="top" |T
| valign="top" |TATCTCGGTTAACGGGAGTG
GCAGGGATATTTGACTTGAATG
| valign="top" |ss49838389
|-
| valign="top" |09:050927124
| valign="top" |DS048415-2
| valign="top" |G
| valign="top" |A
| valign="top" |TTCCCAAATACTGAATCTGC
GGATCTGTTCATCGAGGTTC
| valign="top" |ss49838964
|-
| valign="top" |10:012029287
| valign="top" |DS027483-3
| valign="top" |T
| valign="top" |G
| valign="top" |CATTTAATAAAGGAATCACTACTCTT
AGTCAGTTTACTAACCTTGCTTT
| valign="top" |ss49838277
|-
| valign="top" |10:012029405
| valign="top" |DS027483-4
| valign="top" |T
| valign="top" |C
| valign="top" |CATTTAATAAAGGAATCACTACTCTT
AGTCAGTTTACTAACCTTGCTTT
| valign="top" |ss49838278
|-
| valign="top" |11:019554122
| valign="top" |DS025015-3
| valign="top" |A
| valign="top" |G
| valign="top" |AAAGAGCGTCAAGATGTGTG
GCCTAACAGTACCATTCTTGG
| valign="top" |ss49838173
|-
| valign="top" |11:026314774
| valign="top" |DS033040
| valign="top" |C
| valign="top" |T
| valign="top" |ATCTCGACAACTCTGCTTCC
AGTCCAGCAGAAATTGCAC
| valign="top" |ss49815810
|-
| valign="top" |20:031443053
| valign="top" |DS053166-2
| valign="top" |G
| valign="top" |A
| valign="top" |TTAGGACACTCCACCATGAG
TGCATGAAGACAGAGCAGAG
| valign="top" |ss49839067
|-
| valign="top" |21:013840265
| valign="top" |DS028819-10
| valign="top" |G
| valign="top" |A
| valign="top" |GTCCTTCCTGAAGCACTGAG
TGTGAAAGGTTTTACTGTATTTC
| valign="top" |ss49838329
|-
| valign="top" |21:017891301
| valign="top" |DS023849-2
| valign="top" |C
| valign="top" |A
| valign="top" |TCTGACACAGGAAATAGTATGG
CGAATCATATGGGAGTCGTT
| valign="top" |ss49838138
|-
| valign="top" |22:002853759
| valign="top" |DS036535-2
| valign="top" |G
| valign="top" |T
| valign="top" |AACTATGAGGCAGTCCGTTC
AACTGATCCGTGAGTTGTCC
| valign="top" |ss49838647
|}
表 B.1 常用实验斑马鱼品系 SNP 分子标记位点(续)
{| class="wikitable"
| valign="top" |染色体:位点
| valign="top" |SNP ID
| valign="top" |AB
| valign="top" |TU
| valign="top" |引物(5´~3´)
| valign="top" |dbSNP ID
|-
| valign="top" |22:022530591
| valign="top" |DS020970-1
| valign="top" |A
| valign="top" |T
| valign="top" |AAGCTGCTCATGTCACTCG
GGGACAGGGTACAGGTAAGG
| valign="top" |ss49838044
|-
| valign="top" |23:009386243
| valign="top" |DS022349-1
| valign="top" |T
| valign="top" |C
| valign="top" |GATGAGGACATGAGCTTGG
TGACCAAACACCCTTAAATG
| valign="top" |ss49838099
|-
| valign="top" |23:009386361
| valign="top" |DS022349-7
| valign="top" |A
| valign="top" |T
| valign="top" |GATGAGGACATGAGCTTGG
TGACCAAACACCCTTAAATG
| valign="top" |ss49838105
|-
| valign="top" |24:017922488
| valign="top" |DS055282-4
| valign="top" |A
| valign="top" |G
| valign="top" |GAGACGGGCACTGAACAC
GGATGTTTGTCACCCAAAG
| valign="top" |ss49839131
|-
| valign="top" |24:017922536
| valign="top" |DS055282-5
| valign="top" |A
| valign="top" |G
| valign="top" |GAGACGGGCACTGAACAC
GGATGTTTGTCACCCAAAG
| valign="top" |ss49839132
|-
| valign="top" |25:033544463
| valign="top" |DS024735-2
| valign="top" |A
| valign="top" |G
| valign="top" |TCTTGACATCGGTGGTGAG
TTGTATTGGTGCTGTGACC
| valign="top" |ss49838169
|}
B.5     实验结果
B.5.1        实验鱼检测结果判定
按照表A.15的规定执行。
B.6     结果报告
根据判定结果对实验动物群体出具遗传质量检测报告。 
附   录   C
(规范性)
MHC 单倍型实验鸡和实验鸭直接测序检测方法
C.1     基因组DNA的提取
基因组DNA提取方法按照NY/T 1673的规定执行。
C.2     PCR扩增引物
PCR扩增引物序列、片段长度及退火温度按表C.1和表C.2的规定执行。
表 C.1 单倍型实验鸡 PCR 遗传检测引物序列表
{| class="wikitable"
| valign="top" |扩增片段
| valign="top" |引物
| valign="top" |引物序列
| valign="top" |扩增片段
| valign="top" |退火温度(℃)
|-
| rowspan="2" valign="top" |片段(1)
| valign="top" |1F
| valign="top" |5′-CCGTGGGATCCTCAGACC-3′
| rowspan="2" valign="top" |384 bp
| rowspan="2" valign="top" |56.4
|-
| valign="top" |1R
| valign="top" |5′-CGGCACTGCGCCATGGAG-3′
|-
| rowspan="2" valign="top" |片段(2)
| valign="top" |2F
| valign="top" |5′-CTGTGTTTCAGGGTCTCACAC-3′
| rowspan="2" valign="top" |442 bp
| rowspan="2" valign="top" |56.4
|-
| valign="top" |2R
| valign="top" |5′-GCAGGACAAGGTCAGGATC-3′
|}
表 C.2 单倍型实验鸭 PCR 遗传检测引物序列表
{| class="wikitable"
| valign="top" |扩增片段
| valign="top" |引物
| valign="top" |引物序列
| valign="top" |扩增片段
| valign="top" |退火温度(℃)
|-
| rowspan="2" valign="top" |片段
| valign="top" |1F
| valign="top" |5′-ATGGAGTTGCTGCCCACCTTGCGCCTG-3′
| rowspan="2" valign="top" |984 bp
| rowspan="2" valign="top" |60
|-
| valign="top" |1R
| valign="top" |5′-TGAAACCCATCAGGCACCATCCCAGGT-3′
|}
C.3     PCR扩增
C.3.1        PCR扩增体系
PCR总反应体积为15 μL, 其中含10×PCR buffer:1.5 μL,上下游引物(100 pmol/μL) 各1 μL ,4×dNTP 100μmol/L:1 μL ,Taq 酶1 U:1 μL ,50 ng ~ 100 ng 基因组DNA:1 μL , 纯水 (ddH2O) :8.5 μL。PCR反应程序为:95 ℃预变性,4 min;94 ℃变性,30 s;退火温度(各位点序列、PCR反应条件参见表C.1),30 s;72 ℃延伸,30 s;35个循环;72 ℃继续延伸7 min;扩增产物4 ℃保存。
C.3.2        PCR产物的检测
PCR反应结束后,经琼脂糖凝胶电泳检测,检测合格的PCR产物进行测序。测序结果与标准序列进行
比对分析,计算一致率。
C.4     单倍型MHC实验动物标准结果判定
所有样本序列与参考标准序列比对,一致率达100%,判为合格。
C.5     单倍型MHC实验鸡标准序列
C.5.1        B2单倍型实验鸡标准序列
片段(1)
CGTGGGATCCTCAGACCCACACCCGCGGCTCACGGCCCCGCTGCGCTCCGTCCCCGCAGAGCTCCATACCCTGCGGTACATCTCT ACGGCGATGACGGATCCCGGCCCCGGGCAGCCGTGGTACGTGGACGTGGGGTACGTGGACGGGGAACTCTTCACGCACTACAACAGCAC CGCTCGGAGGGCTGTGCCCCGCACCGAGTGGATAGCGGCCAACACGGACCAGCAGTACTGGGACAGAGAGACGCAGATCGCACAGGGCA ATGAGCAGATTGACCGCGAGAACCTGGACATACGGCAGCAGCGCCACAACCAGACCGGCGGTGAGCACGGCCGGGGCCGCGGCTCCGTG GGTGTGGGATGGACTCCATGGCGCAGTGCCG
片段(2)
CTGTGTTTCAGGGTCTCACACGGCGCAGTGGATGTACGGCTGTGACATCCTCGAGGACGGCACCATCCGGGGGTATCATCAGATG GCCTGCGATGGGAGAGACTTCATTGCCCTCGCTGAAGACATGAAGACGTTCACTGCAGCAGTTCCAGAGGCAGTTCCCACCAAGAGGAA ATGGGAGGAAGGAGGTTATGCTGAGAGGAAGAAGCAGTACC-TGGAGGAAACCTGCGTGGAGGGGCTGCGGAGATACGTGGAATACGGG AAGGCTGAGCTGGGCAGGAGAGGTGAGCAGGGT--------GGGGGGGGGGC        CGCAGTGTGGGGCTGGACGTGGGCCGGGGGC
TCAGTGTGGGGAGCTCAGCCCGGCCCTCATTGCCACCCGCCT-GCAGAGCGGCCTGAGGTGCGAGTGTGGGGGAAGGAGGCCGACGGGA   TCCTGACCTTGTCCTGC
C.5.2        B5单倍型实验鸡标准序列
片段(1)
CCGTGGGATCCTCAGACCCCCACCCGCGGCTCACGGCCCCGCTGCGCTCCGCCCCCGCAGAGCTCCATACCCTGCGGTACATCCA TACGGCGATGACGGATCCCGGCCCCGGGCAGCCGTGGTACGTGGACGTGGGGTATGTGGACGGGGAACTCTTCGTGCACTACAACAGCA CCGCGCGGAGGTACGTGCCCCGCACCGAGTGGATGGCGGCCAAGGCGGACCAGCAGTACTGGGATGAACAGACGCAGATCGCACAGGGC AATGAGCGGAGTGTGAAAGTGAGCCTGGACACACTGCAGGAACGATACAACCAGACCGGCGGTGAGCACGGCCGGGGCCGCGGCTCCGT GGGTGTGGGATGGGCTCCATGGCGCAGTGCCG
片段(2)
CTGTGTTTCAGGGTCTCACACGGCGCAGTGGATGTACGGCTGTGACATCCTCGAGGACGGCACCATCCGGGGGTATCATCAGGAG GCCTACGATGGGAGAGACTTCATTGCCTTCGACAAAGGCACGATGACGTTCACTGCGGCAGTTCCAGAGGCAGTTCCCACCAAGAGGAA ATGGGAGGAAGGAGGTGTTGCTGAGGGGCGGAAGCAGTACCTGGAGGAAACCTGTGTGGAGTGGCTGCGGAGATACGTGGAATATGGGA AGGCTGAGCTGGGCAGGAGAGGTGAGTGGGGTGGAGGGGGGGCCACGGTGTGGGGCTGGACATGGGGCGGGGGCTCAGCGTGGGGATCT CAGCCCGGCCCTCACTGCCACCCGCCCGCAGAGCGGCCCGAGGTGCGAGTGTGGGGGAAGGAGGCCGACGGGATCCTGACCTTGTCCTG    C
C.5.3        B13单倍型实验鸡标准序列
片段(1)
CCGTGGGATCCTCAGACCCCCACCCGCGGCTCACGGCCCCGCTGCGCTCCGCCCCCGCAGAGCTCCATACCCTGCGGTACATCCA TACGGCGATGACGGATCCCGGCCCCGGGCAGCCGTGGTACGTGGACGTGGGGTATGTGGACGGGGAACTCTTCGTGCACTACAACAGCA CCGCGCGGAGGTACGTGCCCCGCACCGAGTGGATGGCGGCCAAGGCGGACCAGCAGTACTGGGATGGACAGACGCAGATCGGACAGCGC AATGAGCGGAGTGTGAAAGTGAGCCTGGACACACTGCAGGAACGATACAACCAGACCGGCGGTGAGCACGGCCGGGGCCGCGGCTCCGT GGGTGTGGGATGGGCTCCATGGCGCAGTGCCG
片段(2)
CTGTGTTTCAGGGTCTCACACGGTGCAGTGGATGTTCGGCTGTGACATCCTCGAGGATGGCACCATCCGGGGGTATCGTCAGGTG GCCTACGATGGGAAAGACTTCATTGCCTTCGACAAAGACATGAAGACGTTCACTGCGGCAGTTCCAGAGGCAGTTCCCACCAAGAGGAA ATGGGAGGAAGGAGGTGTTGCTGAGGGGTGGAAGAGTTACCTGGAGGAAACCTGCGTGGAGTGGCTGCGGAGATACGTGGAATACGGGA AGGCTGAGCTGGGCAGGAGAGGTGAGTGGGGTGGGGGGGGGGCCGCGGTGTGGGGCTGGACGTGGGGCGGGGGCTCAGCGTGGGGAGCT CAGCCCGGCCCTCATTGCCACCTGCCTGCAGAGCGGCCTGAGGTGCGAGTGTGGGGGAAGGAGGCCGACGGGATCCTGACCTTGTCCTG    C
C.5.4        B15单倍型实验鸡标准序列
片段(1)
CGTGGGATCCTCAGACCCCCACCCGCGGCTCACGGCCCCGCTGCGCTCCGCCCCCGCAGAGCTCCATACCCTGCGGTACATCCAT ACGGCGATGACGGATCCCGGCCCCGGGCAGCCGTGGTACGTGGACGTGGGGTATGTGGACGGGGAACTCTTCGTGCACTACAACAGCAC CGCGCGGAGGTACGTGCCCCGCACCGAGTGGATGGCGGCCAAGGCGGACCAGCAGTACTGGGATGGACAGACGCAGATCGGACAGCGCA ATGAGCGGAGTGTGAAAGTGAGCCTGGACACACTGCAGGAACGATACAACCAGACCGGCGGTGAGCACGGCCGGGGCCGCGGCTCCGTG GGTGTGGGATGGGCTCCATGGCGCAGTGCCG
片段(2)
CTGTGTTTCAGGGTCTCACACGGTGCAGTGGATGTTCGGCTGTGACATCCTCGAGGATGGCACCATCCGGGGGTATCGTCAGGTG GCCTACGATGGGAAAGACTTCATTGCCTTCGACAAAGACATGAAGACGTTCACTGCGGCAGTTCCAGAGGCAGTTCCCACCAAGAGGAA ATGGGAGGAAGGAGGTGTTGCTGAGGGGTGGAAGAGTTACC-TGGAGGAAACCTGCGTGGAGTGGCTGCGGAGATACGTGGAATACGGG AAGGCTGAGCTGGGCAGGAGAGGTGAGTGGGGT--------GGGGGGGGGGC        CGCGGTGTGGGGCTGGACGTGGGGCGGGGGC
TCAGCGTGGGGAGCTCAGCCCGGCCCTCATTGCCACCTGCCT-GCAGAGCGGCCCGAGGTGCGAGTGTGGGGGAAGGAGGCCGACGGGA   TCCTGACCTTGTCCTGC
C.5.5        B19单倍型实验鸡标准序列
片段(1)
CCGTGGGATCCTCAGACCCCCACCCGCGGCTCACGGCCCCGCTGCGCTCCGCCCCCGCAGAGCTCCATTCCCTGCGGTACGTCCA TACGGCGATGACGGATCCCGGCCCCGGGCTGCCGTGGTTCGTGGACGTGGGGTACGTGGACGGGGAACTCTTCGTGCACTACAACAGCA CCGCGCGGAGGTACGTGCCCCGCACCGAGTGGATGGCGGCCAACACGGACCAGCAGTACTGGGATGGACAGACGCAGATCGGACAGGGC AATGAGCGGAGTGTGAAAGTGAGCTTGAACACACTGCAGGAACGATACAACCAGACCGGCGGTGAGCACGGCCGGGGCCGCGGCTCCGT GGGTGTGGGATGGGCTCCATGGCGCAGTGCCG
片段(2)
CTGTGTTTCAGGGTCTCACACGGTGCAGCTGATGTACGGCTGTGACATCCTCGAGGATGGCACCATCCGGGGGTATCATCAGACA GCCTACGATGGGAGAGACTTCATTGCCTTCGACAAAGGCACGATGACGTTCACTGCGGCAGTTCCAGAGGCAGTTCCCACCAAGAGGAA ATGGGAGGAAGGAGGTGTTGCTGAGAGGTGGAAGAGTTACC-TGGAGGAAACCTGCGTGGAGGGGCTGCGGAGATATGTGGAATACGGG AAGGCTGAGCTGGGCAGGAGAGGTGAGCGGGGTCGGGGTGGGGGGGGGGGGG--CGGACGCAGTGTGGGGCTGGACGTGGGGCGGGGGC TCATCGTGGGGAGCTCAGCCCGGCCCTCACTGCCGCCCACCC-ACAGAGCGGCCTGAGGTGCGAGTGTGGGGGAAGGAGGCTGACGGGA TCCTGACCTTGTCCTGC
C.5.6        B21单倍型实验鸡标准序列
片段(1)
CCGTGGGATCCTCAGACCCCCACCCGCGGCTCACGGCCCCGCTGCGCTCCGCCCCCGCAGAGCTCCATACCCTGCGGTACATCCA TACGGCGATGACGGATCCCGGCCCCGGGCAGCCGTGGTACGTGGACGTGGGGTATGTGGACGGGGAACTCTTCGTGCACTACAACAGCA CCGCGCGGAGGTACGTGCCCCGCACCGAGTGGATGGCGGCCAAGGCGGACCAGCAGTACTGGGATGGACAGACGCAGATCGGACAGCGC
AATGAGCGGAGTGTGAAAGTGAGCCTGGACACACTGCAGGAACGATACAACCAGACCGGCGGTGAGCACGGCCGGGGCCGCGGCTCCGT  GGGTGTGGGATGGGCTCCATGGCGCAGTGCCG
片段(2)
CTGTGTTTCAGGGTCTCACACGGTGCAGTGGATGTTCGGCTGTGACATCCTCGAGGATGGCACCATCCGGGGGTATCGTCAGGTG GCCTACGATGGGAAAGACTTCATTGCCTTCGACAAAGACATGAAGACGTTCACTGCGGCAGTTCCAGAGGCAGTTCCCACCAAGAGGAA ATGGGAGGAAGGAGGTGTTGCTGAGGGGTGGAAGAGTTACC-TGGAGGAAACCTGCGTGGAGTGGCTGCGGAGATACGTGGAATACGGG AAGGCTGAGCTGGGCAGGAGAGGTGAGTGGGGTGGGGGGGGGGCCGCGGTGTGGGGCTGGACGTGGGGCGGGGGCTCAGCGTGGGGAGC TCAGCCCGGCCCTCATTGCCACCTGCCT-GCAGAGCGGCCCGAGGTGCGAGTGTGGGGGAAGGAGGCCGACGGGATCCTGACCTTGTCC   TGC
C.6     单倍型MHC实验鸭参考序列
C.6.1        B1单倍型MHC实验鸭参考序列
ATGGAGTTGCTGCCCACCTTGTGCCTGGCCTGTGTCCTGCTCCTGGCTGACCTGGTCGTGCTGGCAGCACTGGCCCGGTTGGCCC CGGCACTGGCCCAGCTGGGTCTAGTGGCCACATGGCTGGAGGCTGGGCTGCGGCTACCAGTGCTGGTGGGAGCTGGGAGGCTGTTGGCC CCCGGAGGACCCCGGGGAGCCCCGGCCCTGGTGAGCCTGGCCCCTGCCACCTTCCTTACCCTGCGGGGCTGCCTGGAGCTGCCTGGGGC TCCACCAGTGCTGCTGGCCATGGCCACACCGTCCTGGCTGGCATTGGCCTATGGGGCAGTCTTGCTGGCCCTGCTCACCTGGACCTCCC TGGCACCTGGGGTGGCCCTGGGGACCAAGGAGGTCAAGTACCAGGCGGCCCTGCACCGGCAGCTGGCCCTGGCCTGGCCTGAGTGGCCC TTCCTCAGCGGAGCCTTCTTCTTCCTCATGCTGGCTGCATTGGGTGAGACCTCCGTGCCCTACTGCACTGGGAAGGCCTTGGATGTCCT CCGTCATGGGGATGGCCCCACTGCCTTTGCTACTGCCATCGGCTTTGTGTGCCTCGCCTCTGCCAGCAGGTAGGGACCCCCAGTTCCTC TCCCAGACCCTGTCCACACCTGGGATGGTGCCTGATGGGTTTCA
C.6.2        B2单倍型MHC实验鸭参考序列
ATGGAGTTGCTGCCCACCTTGCGCCTGGCCTGTGTCCTGCTCCTGGCTGACCTGGTCGTGCTGGCAGCACTGGCCCGGTTGGCCC CGGCACTGGCACAGCTGGGTCTGGTGGCCACATGGCTGGAGGCTGGGCTGCGGCTACCAGTGCTGGTGGGAGCTGGGAGGCTGTTGGCC CCCGGAGGACCCCAGGGAGCCGCAGCCCTGGTGAGCCTGGCCCCTGCCACCTTCCTTACCCTGCGGGGCTGCCTGGAGCTGCCTGGGGC TCCACCAGTGCTGCTGGCCATGGCCACACCGTCCTGGCTGGCATTGGCCTATGGGGCAGTCTTGCTGGCCCTGCTCACCTGGACCTCCC TGGCACCTGGGGTGGCCCTGGGGACCAAGGAGGTCAAGTACCAGGCGGCCCTGCGCCGGCAGCTGGCCCTGGCCTGGCCTGAGTGGCCC TTCCTCAGCGGAGCCTTCTTCTGCCTCGTGCTGGCTGCATTGGGTGAGACCTCCGTGCCCTACTGCACTGGGAAGGCCTTAGATGTCCT CCGCCATGGGGACGGCCCCACTGCCTTTGCCACTGCCATCGGCTTTGTGTGCCTCGCCTCTGCCAGCAGGTAGGGACCCCCAGTTCCTC TCCCAGAGCCTGTCCACACCTGGGATGGTGCCTGATGGGTTTCA
C.6.3        B3单倍型MHC实验鸭参考序列
ATGGAGTTGCTGCCCACCTTGCGCCTGGCCTGTGTCCTGCTCCTGGCTGACCTGGTGGTGCTCGCAGCACTGGCCCGGTTGGCCC CGGCACTGGCCCAGCTGGGTCTAGTGGCCACATGGTTGGAGGCTGGGCTGCGGCTACCAGTGCTGGTGGGAGCTGGGATGCTGTTGGCC CCCGGAGGACCCCGGGGAGCGGCAGCCCTGGTGAGCCTGGCCCCTGCCACCTTCCTTACCCTGCGGGGCTGCCTGGAGCTGCCTGGGGC TCCACCAGTGCTGCTGGCCATGGCCACACCATCCTGGCTGGCATTGGCCTATGGGGCAGTCTTGCTGGCCCTGCTCACCTGGACCTCCC TGGCACCTGGGGTGGCCCTGGGGACCAAGGAGGTCAAGTACCAGGCGGCCCTGCGCCGGCAGCTGGCCCTGGCCTGGCCTGAGTGGCCC TTCCTCAGCGGAGCCTTCTTCTTCCTCGTGCTGGCTGCATTGGGTGAGACCTCCGTGCCCTACTGCACTGGGAAGGCCTTAGATGTCCT CCGCCATGGGGACGGCCCCACTGCCTTTGCCACTGCCATCGGCTTTGTGTGCCTTGCCTCCGCCAGCAGGTAGGGACCTCCAGTTCCTC TCCCAGACCCTGTCCACACCTGGGATGGTGCCTGATGGGTTTCA
C.6.4        B4单倍型MHC实验鸭参考序列
ATGGAGTTGCTGCCCACCTTGCGCCTGGCCTGTGTCCTGCTCCTGGCTGACCTGGTCGTGCTGGCAGCACTGGCCCAGTTGGCCC CGGCACTGGCCCAGCTGGGTCTAGTGGCCACATGGCTGGAGGCTGGGCTGCGGCTACCAGTGCTGGTGGGAGCTGGGATGCTGTTGGCC CCCGGAGGACCCCGGGGAGCCGCGGCCCTGGTGAGCCTGGCCCCTGCCACCTTTCTTACCCTGCGGGGCTGCCTGGAGCTGCCTGGGGC TTCACCAGTGCTGCTAGCCATGGCCACACCGTCCTGGCTGGCATTGGCCTACGGGGCAGTCTTGCTGGCCCTGCTCACCTGGACCTCCC TGGCACCTGGGGTGGCCCTGGGGACCAAGGAGGTCAAGTACCAGGCGGCCCTGCGCCGGCAGCTGGCCCTGGCCTGGCCTGAGTGGCCC TTCCTCAGTGGAGCCTTCTTCTGCCTCGTGCTGGCTGCATTGGGTGAGACCTCCGTGCCCTACTGCACTGGGAAGGCCTTAGATGTCCT CCGCCATGGGGACGGCCCCACTGCCTTTGCCACTGCCATCGGCTTTGTGTGCCTTGCCTCCGCCAGCAGGTAGGGACCCCCAGTTCCTC TCCTAGACCCTGTCCACACCTGGGATGGTGCCTGATGGGTTTCA 
参   考   文   献
[1]     GB 14925—2023 实验动物 环境及设施
[2]     杨芳,何保丽,何永蜀, 等. 树鼩生化与微卫星标记的初步研究[J].昆明医学院学报, 2010,5: 8-11.
[3]     张媛,李晓飞,李振宇, 等. 滇西亚种树鼩微卫星分子标记的筛选[J].中国比较医学杂志, 2015,25: 36-41.
[4]     Fan Y, Huang ZY, Cao CC, et al. 2013. Genome of the Chinese tree shrew[J]. Nature communications, 4:1426.
[5]     Liu XH, Yao YG. Characterization of 12 polymorphic microsatellite markers in the Chinese tree shrew (Tupaia belangeri chinensis) [J],2013, 34(E2):E62-8.
[6]     Xu L, Chen SY, Nie WH, et al. Evaluating the phylogenetic position of Chinese tree shrew ( Tupaia belangeri chinensis) based on complete mitochondrial genome: implication for using tree shrew as an alternative experimental animal to primate in biomedical research[J]. J Genet Genomics,2012, 39( 3) : 131-137.
[[分类:实验动物标准(北京地标)]]
[[分类:标准一览表]]

2025年10月15日 (三) 11:04的最新版本

ICS 65.020.30

CCS B 44

DB11

北       京       市       地       方       标       准

DB11/T 1804—2025

代替 DB11/T 1804—2020

实验动物 繁育与遗传监测

Laboratory animal—Breeding and genetic monitoring

2025-04-01 发布                                                        2025-07-01 实施

北京市市场监督管理局     发 布

目       次

前言............................................................................................................................................... II

1      范围............................................................................................................................................ 1

2      规范性引用文件.......................................................................................................................... 1

3      术语和定义................................................................................................................................. 1

4      缩略语........................................................................................................................................ 2

5      遗传分类及命名原则................................................................................................................... 2

6      繁殖方法..................................................................................................................................... 4

7      遗传监测..................................................................................................................................... 5

附录 A(规范性)     实验动物微卫星 DNA 标记遗传检测方法............................................................. 8

附录 B(规范性)     实验斑马鱼 SNP 遗传标记的检测方法............................................................... 27

附录 C(规范性)     MHC 单倍型实验鸡和实验鸭直接测序检测方法.................................................... 30

参考文献......................................................................................................................................... 35

前   言

本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则  第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件代替DB11/T 1804—2020《实验动物 繁育与遗传监测》,主要技术变化如下:

a)     增加了“实验树鼩繁育与遗传监测”相关内容(见 5、6、7、附录 A);

b)     近交系实验动物抽样数量(见  7.2.2)。

本文件由北京市科学技术委员会、中关村科技园区管理委员会提出并归口。本文件由北京市科学技术委员会、中关村科技园区管理委员会组织实施。

本文件起草单位:首都医科大学、中国食品药品检定研究院、北京市实验动物管理办公室、中国医学科学院医学实验动物研究所、中国人民解放军军事医学研究院、国家卫生健康委员会科学技术研究所、杭州医学院、吉林大学、中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、中国农业科学院北京畜牧兽医研究所、北京市标准化研究院、北京华阜康生物科技股份有限公司、北京康蓝生物技术有限公司、中国科学院水生生物研究所、北京大学、清华大学、中国医学科学院医学生物学研究所、中国科学院昆明动物研究所。

本文件主要起草人:陈振文、李根平、贺争鸣、李长龙、刘云波、孙德明、岳秉飞、李奎、杨述林、冯书堂、杜小燕、向志光、王洪、董罡、任文陟、陈洪岩、陈继兰、巩薇、冯育芳、郭红刚、王熙、李吏、王锡乐、刘文菊、谢佳琪、樊子风、萨晓婴、刘先菊、丛日旭、腾永康、肖冲、魏杰、于鹏丽、牟玉莲、公维华、张宁波、徐玲玲、崔宗斌、张博、孙荣泽、韩凌霞、常在、刘苗苗、唐倩倩、代解杰、吕龙宝、王文广、王芸、马玉华。

本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为:

——首次发布分别为DB11/T 828.3—2011、DB11/T 1053.3—2013、DB11/T 1461.1—2017、DB11/T 1461.2—2017、DB11/T 1461.3—2017、DB11/T 1461.4—2018、DB11/T 1461.5—2018;

——2020年发布为DB11/T  1804—2020;

——本次为第二次修订。

实验动物 繁育与遗传监测

1      范围

本文件规定了实验动物的遗传分类及命名原则、繁殖方法和遗传检测。

本文件适用于实验小型猪、实验猪、实验牛、实验羊、实验狨猴、实验长爪沙鼠、实验猫、实验雪貂、实验鸡、实验鸭、实验鹅、实验鸽、实验鱼(斑马鱼和剑尾鱼)、实验树鼩的繁育和遗传监测。

2      规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB 14923       实验动物 遗传质量控制

GB/T 2416 东北细毛羊
GB/T 3157 中国荷斯坦牛
GB/T 19166 中国西门塔尔牛
GB/T 19376 波尔山羊种羊
GB/T 22283 长白猪种猪
GB/T 22284 大约克夏猪种猪
GB/T 22285 杜洛克猪种猪
GB/T 22909 小尾寒羊
GB/Z 34792 实验动物      引种技术规程

NY/T 14      高产奶牛饲养管理规范

NY 625      迪卡配套系猪种猪

NY/T 1339 肉牛育肥良好管理规范
NY/T 1446 种公牛饲养管理技术规程
NY/T 1673 畜禽微卫星DNA遗传多样性检测技术规程
NY/T 1901 鸡遗传资源保种场保种技术规范
NY/T 2662 标准化养殖场       奶牛
NY/T 2665 标准化养殖场       肉羊

3      术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

实验动物   laboratory animal

经人工饲育,对其携带的微生物和寄生虫实行控制,遗传背景明确或者来源清楚,用于科学研究、

教学、生产和检定以及其他科学实验的动物。

3.2

实验种群   experimental population

以远交方式进行繁殖生产的实验动物群体。

3.3

封闭群   closed colony

不引进外部动物、在群体内随机选择种动物进行繁殖,以维持有限杂合度的实验动物种群。

3.4

近交系   inbred strain

一个动物群体中,任何个体基因组中98.6%以上的座位为纯合的品系。

注:经典近交系经至少连续20代的全同胞兄妹交配培育而成。品系内所有个体都可追湖到起源于第  20  代或以后代

数的一对共同祖先。经连续 20代以上亲子交配与全同胞兄妹交配有等同效果。近交系的近交系数(inbreeding coefficient)大于98.6%。

3.5

单倍型群体   haplotype population

通过近亲交配繁殖方式培育出的单倍体基因型一致的实验动物群体。

3.6

杂交群   hybrids

由两个不同近交系杂交产生的后代群体。

注:子一代简称F1。

4      缩略语

下列缩略语适用于本文件。

PCR:聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction) SNP: 单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism) STR: 短串联重复序列(Short Tandem Repeat)

5      遗传分类及命名原则

5.1     遗传分类

根据不同品种品系动物及个体间遗传差异将实验动物分为实验种群、封闭群、近交系、单倍型群体

和杂交群,具体符合表1的要求。

表1   实验动物遗传分类表

实验动物群体 遗传分类
实验长白猪 实验种群
实验大约克夏猪
实验杜洛克猪

实验种群

实验中国荷斯坦牛
实验西门塔尔牛
实验波尔山羊
实验小尾寒羊
实验东北细毛羊
实验狨猴
实验猫
实验雪貂
实验长爪沙鼠

封闭群

实验鸡
实验鸭
实验鹅
实验鸽
实验小型猪
实验斑马鱼
实验剑尾鱼
实验树鼩
实验小型猪

近交系

实验斑马鱼
实验剑尾鱼
实验鸡 单倍型群体
实验鸭

5.2     命名原则

5.2.1         实验种群

在原有的品种品系名称前面加上实验,如实验长白猪。

5.2.2         封闭群

由2~4个大写英文字母命名。种群名称前标明保持者的英文缩写名称,第一个字母大写,后面的字母小写,宜不超过4个字母。保持者与种群名称之间用冒号分开。

5.2.3         近交系

以大写英文字母或大写英文字母加阿拉伯数字命名,符号应简短。

5.2.4         单倍型群体

以单倍体基因型英文名称(或缩写)加英文字母和阿拉伯数字命名,符号应简短。

5.2.5         杂交群

以雌性亲代名称在前,雄性亲代名称居后,二者之间以大写英文字母“”相连表示杂交。将以上部分用括号括起,再在其后标明杂交的代数(如F1、F2等)。

6      繁殖方法

6.1     实验种群

6.1.1         引种

选择双亲健康、无遗传疾病、繁殖性能好、体貌符合品种特征的动物作为种用动物。

6.1.2         繁育方法

实验猪按照NY 625的规定进行。

实验西门塔尔牛按照NY/T 1339和NY/T 1446规定执行,实验中国荷斯坦牛按照NY/T 14和NY/T 2662

的规定进行。

实验羊应按照GB 14923和NY/T 2665的规定进行。实验狨猴和雪貂应按GB 14923的规定进行。

实验猫按照雌雄5:1以上比例进行繁殖。

6.2     封闭群

6.2.1         引种

作为繁殖用种子的封闭群动物应三代以内无共同亲代并符合GB/Z 34792对封闭群种用动物的要求。

封闭群实验长爪沙鼠、实验鸽和实验树鼩引种数量不少于25对。

封闭群实验小型猪引种数量不少于13对(循环交配方式繁殖)或25对(随机交配方式繁殖)。封闭群实验鱼(斑马鱼和剑尾鱼)引种数目不少于100尾。

实验鸡、实验鸭和实验鹅引种规模按照NY/T 1901执行。

其他封闭群实验动物引种规模按照GB 14923规定执行。

6.2.2         繁育方法

封闭群实验小型猪、实验长爪沙鼠、实验鸽和实验树鼩繁殖方法按照GB 14923的规定执行。实验鸡、实验鸭、实验鹅应按照NY/T 1901的规定进行。

6.3     近交系

6.3.1         引种

作为繁殖用种子的近交系动物应符合GB/Z 34792对近交系种用动物的要求。

6.3.2         繁育方法

近交系实验动物可分为基础群(foundation stock)、血缘扩大群(pedigree expansion stock)和生产群(production stock),当近交系动物生产供应数量不是很大时,可不设血缘扩大群,仅设基础群和生产群。各基础群、血缘扩大群和生产群的繁育方式按照GB 14923执行。

6.4     单倍型群体

6.4.1         引种

作为繁殖用种子的单倍型群体动物按照GB/Z 34792的规定执行。

6.4.2         繁育方法

以全同胞或半同胞兄妹交配方式进行。

6.5     杂交群

将不同品系实验动物的亲代雌性与亲代雄性杂交,即可得到F1实验动物。

7      遗传监测

7.1     遗传要求

遗传满足以下要求:

——体貌符合品种特征;

——谱系记录清楚;

——繁殖方法科学;

——群体遗传符合品种特征;

——遗传质量检测合格。

7.2     遗传检测

7.2.1         检测频率

每12个月至少进行一次检测。

7.2.2         抽样

7.2.2.1          实验种群和封闭群抽样数量

从每个种群中随机抽取非同窝成年实验动物的血液或其他组织,雌雄各半。抽样数量按照表2规定执行。

表2   实验种群和封闭群遗传检测抽样数量

群体大小(只/头/羽) 抽样数量(只/头/羽)
<100 ≥15
≥100 ≥30

7.2.2.2          近交系实验动物抽样数量

基础群留种动物的双亲均应进行遗传检测;各生产群体采取随机抽取非同窝成年动物雌雄各半,抽样数量按照表3规定执行。一般不超过 30只。

表3   近交系实验动物遗传检测抽样数量

群体大小(只/头/羽/尾) 抽样数量(只/头/羽/尾)
<100 ≥6
≥100 ≥群体数量×6%

7.2.3         遗传检测方法

采用群体遗传结构评估、微卫星DNA标记、SNP分子标记和直接测序等检测方法,在有检测能力的实验室进行,具体按照表4规定执行。

表4   遗传检测方法适用实验动物群体

实验动物群体 遗传分类 检测方法 执行标准或方法
实验长白猪

实验种群

群体遗传结构评估

按照 GB/T 22283 的规定执行
实验大约克夏猪 按照 GB/T 22284 的规定执行
实验杜洛克猪 按照 GB/T 22285 的规定执行
实验中国荷斯坦牛 按照 GB/T 3157 的规定执行
实验西门塔尔牛 按照 GB/T 19166 的规定执行
实验波尔山羊 按照 GB/T 19376 的规定执行
实验小尾寒羊 按照 GB/T 22909 的规定执行
实验东北细毛羊 按照 GB/T 2416 的规定执行
实验狨猴

微卫星 DNA 标记检测法

按照附录 A 的规定执行

实验猫
实验雪貂
实验长爪沙鼠

封闭群

实验鸡
实验鸭
实验鹅
实验鸽
实验小型猪
实验斑马鱼
实验剑尾鱼
实验树鼩
实验小型猪

近交系

实验斑马鱼 SNP 分子标记检测法 按照附录 B 的规定执行
实验剑尾鱼
实验鸡 单倍型群体 直接测序检测法 按照附录 C 的规定执行
实验鸭

7.2.4         结果判定

7.2.4.1          实验种群检测结果判定

7.2.4.1.1            群体遗传结构评估

当实验猪、实验牛、实验羊体貌特征与品种品系特征相符合时,判定合格,否则判定不合格。

7.2.4.1.2            微卫星 DNA 标记检测法

实验狨猴、实验猫和实验雪貂适用于微卫星DNA标记检测法,具体按照附录A规定执行。

7.2.4.2          封闭群实验检测结果判定

封闭群实验长爪沙鼠、实验鸡、实验鸭、实验鹅、实验鹅、实验小型猪、实验鱼(斑马鱼和剑尾鱼)和实验树鼩采用微卫星DNA标记检测法,具体按照附录A规定执行

7.2.4.3          单倍型群体检测结果判定

单倍型实验鸡和实验鸭采用聚合酶链式反应(PCR)产物直接测序法,具体按照附录C规定执行。

7.2.4.4          近交系检测结果判定

7.2.4.4.1            微卫星 DNA 标记检测法

近交系实验小型猪采用微卫星DNA标记检测法,具体按照附录A规定执行。

7.2.4.4.2            SNP 分子标记检测法

近交系实验鱼采用SNP分子标记检测法,具体按照附录B规定执行。

附   录   A

(规范性)

实验动物微卫星 DNA 标记遗传检测方法

A.1     基因组DNA的提取

基因组DNA提取方法按照NY/T 1673的规定执行。

A.2     微卫星位点

A.2.1       用于检测封闭群和近交系实验小型猪遗传质量的微卫星位点分别为25个和10个,各微卫星位点的名称、染色体位置、引物序列、等位基因数、等位基因范围和退火温度按照表A.1的规定执行。

表A.1   实验小型猪微卫星位点的引物序列、退火温度、等位基因数及等位基因分布范围

位点 引物序列(5´~3´) 所在染色

Mg2+浓度

(mM)

退火温度

(℃)

等位基

因数

等位基因

范围

适用群体
SW974 GGTGAAGTTTTTGCTTTGAACC

GAAAGAAATCCAAATCCAAACC

1 2.0 58 17 129~175 封闭群
S0091 TCTACTCCAGGAGATAAGCCAGAT

CAGTGACTCCATGCACAGTTATGA

2 1.5 55 14 96~174 封闭群
SW240 AGAAATTAGTGCCTCAAATTGG

AAACCATTAAGTCCCTAGCAAA

2 1.5 58 11 92~114 封闭群
SW1066 GCAGGATGAACCACCCTG

CTCTTGAGGCAACCTGCTG

3 2.0 60 19 166~214 封闭群
SW1089 TTTTCCCCTTCACTCACCC

GATCAAAGTCCCTTACTCCGG

4 1.5 58 10 142~190 封闭群
S0005 TCCTTCCCTCCTGGTAACTA

GCACTTCCTGATTCTGGGTA

5 2.0 54 11 204~244 封闭群
SW1057 TCCCCTGTTGTACAGATTGATG

TCCAATTCCAAGTTCCACTAGC

6 2.0 58 14 142~191 封闭群
SW632 TGGGTTGAAAGATTTCCCAA

GGAGTCAGTACTTTGGCA

7 2.0 54 9 148~173 封闭群
OPN CCAATCCTATTCACGAAAAAGC

CAACCCACTTGCTCCCAC

8 2.0 59 12 138~170 封闭群
SW29 AGGGTGGCTAAAAAAGAAAAGG

ATCAAATCCTTACCTCTGCAGC

8 2.0 61 12 133~187 封闭群
SW911 CTCAGTTCTTTGGGACTGAACC

CATCTGTGGAAAAAAAAAGCC

9 2.0 60 14 151~178 封闭群
SW511 AAGCAGGAATCCCTGCATC

CCCAGCCACCAGTCTGAC

9 1.5 62 12 161~196 封闭群

表 A.1   实验小型猪微卫星位点的引物序列、退火温度、等位基因数及等位基因分布范围(续)

位点 引物序列(5´~3´) 所在染色

Mg2+浓度

(mM)

退火温度

(℃)

等位基

因数

等位基因

范围

适用群体
SWr158 TCCAATTCAACTCCTGGCTC

GAATGTGCACATACCACATGC

10 2.0 60 18 158~200 封闭群
SW951 TTTCACAACTCTGGCACCAG

GATCGTGCCCAAATGGAC

10 1.5 58 14 108~142 封闭群
SW271 TTCCAGTGGCTTTCTGTGC

CATTCATTCCCAGTGAAACTTG

11 1.5 58 13 111~144 封闭群
S0386 TCCTGGGTCTTATTTTCTA

TTTTTATCTCCAACAGTAT

11 2.0 48 12 155~178 封闭群
S0068 CCTTCAACCTTTGAGCAAGAAC

AGTGGTCTCTCTCCCTCTTGCT

13 2.0 62 10 210~256 封闭群
SWr1008 ACAGCCACCAACAGTGTTTG

GAACTTCCATATGCTGCAAGTG

13 2.0 62 16 98~256 封闭群
S0007 TTACTTCTTGGATCATGTC

GTCCCTCCTCATAATTTCTG

14 2.0 54 15 142~192 封闭群
SW857 TGAGAGGTCAGTTACAGAAGACC

GATCCTCCTCCAAATCCCAT

14 2.0 58 16 129~173 封闭群
SWr312 ATCCGTGCGTGTGTGCAT

CTGGTGGCTACAGTTCCGAT

15 1.5 64 11 116~136 封闭群
SW81 GATCTGGTCCTGCACAGGG

GGGGCTCTCAGGAAGGAG

16 1.5 60 8 128~144 封闭群
SWr1120 CAAATGGAACCCATTACAGTCC

ACTCCTAGCCCAGGAGCTTC

17 1.5 60 11 147~178 封闭群
S0062 AAGATCATTTAGTCAAGGTCACAG

TCTGATAGGGAACATAGGATAAAT

18 2.0 56 12 144~204 封闭群
S0218 GTGTAGGCTGGCGGTTGT

CCCTGAAACCTAAAGCAAAG

X 1.5 54 11 158~196 封闭群
CGA ATAGACATTATGTAAGTTGCTGAT

GAACTTTCACATCCCTAAGGTCGT

1q 2.5 55 12 250~320 近交系
SW240 AGAAATTAGTGCCTCAAATTGG

AAACCATTAAGTCCCTAGCAAA

2P 1.5 55 8 96~115 近交系
SW72 ATCAGAACAGTGCGCCGT

GTTTGAAAATGGGGTGTTTCC

3P 1.5 55 8 100~116 近交系
S0005 TCCTTCCCTCCTGGTAACTA

GCACTTCCTGATTCTGGGTA

5q 3.0 55 10 205~248 近交系
S0090 CCAAGACTGCCTTGTAGGTGAATA

GCTATCAAGTATTGTACCATTAGG

12q 1.5 55 4 244~251 近交系
SW769 GGTATGACCAAAAGTCCTGGG

TCTGCTATGTGGGAAGAATGC

13 3.0 55 7 106~140 近交系

表 A.1   实验小型猪微卫星位点的引物序列、退火温度、等位基因数及等位基因分布范围(续)

位点 引物序列(5´~3´) 所在染色

Mg2+浓度

(mM)

退火温度

(℃)

等位基

因数

等位基因

范围

适用群体
SW857 TGAGAGGTCAGTTACAGAAGACC

GATCCTCCTCCAAATCCCAT

14 1.5 55 6 144~160 近交系
S0355 TCTGGCTCCTACACTCCTTCTTGATG

GTTTGGGTGGGTGCTGAAAAATAGGA

15 3.0 55 14 243~277 近交系
SW24 CTTTGGGTGGAGTGTGTGC

ATCCAAATGCTGCAAGCG

17 1.5 55 8 96~121 近交系
S0218 GTGTAGGCTGGCGGTTGT

CCCTGAACCCTAAAGCAAAG

X 1.5 55 8 164~184 近交系

A.2.2       用于检测实验狨猴遗传质量的微卫星位点为20个,各微卫星位点的名称、引物序列、等位基因

数、等位基因范围和退火温度按照表A.2的规定执行。

表A.2   实验狨猴微卫星位点的引物序列、退火温度、等位基因数及等位基因分布范围

位点 引物序列(5´~3´) 退火温度(℃) 最大等位基因数 等位基因分布范围
CAJA1 GAAGACGGGGGCGTAAATA

TGTGGTGGCTCATACCTGAA

60 9 386~402
CAJA6 GAGCACCAAGATTGGCATTT

CCAATACACATCGGCTTTGA

60 6 235~243
CAJA10 ACCCTACATTGCCAAATTGC

GCCTCTTCTGAGGGAAGTGA

60 6 198~208
CAJA11 CGAAAGTGTGCTCAACAGGA

AAGGTGGGATTCTGAAAGCA

60 5 254~262
CAJA13 AGCACATGAACACCCAGGTT

AGTGAAAACAGGCTGGGAGA

60 6 378~390
CAJA14 AGCACATGAACACCCAGGTT

AGTGAAAACAGGCTGGGAGA

60 6 216~232
CAJA17 GGGCACTCCAAGGTCAGTAA

TTGCCCCCTGCTTATTGTAG

60 10 382~400
CAJA18 ACTTGCAGGCCAGTGTTCTT

TGGACAGCTGAGGTTTCCTT

63 8 315~329
D10qham51 CGGGAATTCAAAGGCGTTCT

AGGAGGATTTCGCATTTGGG

60 6 103~117
Ham157 CAGCCAACATGCTTCTCAGT

GGTGGAATAAATCAGGCTACCAG

60 6 193~205
Ham60 TGCTCTAGAGGTTCCACTCTG

GGCATGTTACCTAACCTCTCTG

58 8 139~165
Ham65 TGAGAACGACTGCTCTAGGT

TGGAAGTGGCTTCATTCCTG

58 10 177~201

表 A.2   实验狨猴微卫星位点的引物序列、退火温度、等位基因数及等位基因分布范围(续)

位点 引物序列(5´~3´) 退火温度(℃) 最大等位基因数 等位基因分布范围
Ham181 CAATGAGATGTGTCCAAGTGAG

CCAAACACCCAATATGCAGT

58 7 213~239
Ham184 GGCGCAGCTCATCTCTTCAC

CCTCCCCAGCATCTTCAAGAC

63 7 150~172
Ham125 GTGGGTAAATGCTGCCATCT

GTTTCAACTCCTGCGTCTAGTC

59 8 187~201
Ham101 AGACCAAGCATCTTCTTGGAC

CACCTTTAAACTGCTGTGGTTG

59 6 281~297
Ham61 CAAAGATGCTTGGGGATGGA

AAGATCTTGCAGGGCGTAAG

61 10 263~287
Ham32 GCCCAAATCCTGTTTGACAC

CCACCTAGATCATCGAGAGTAG

58 7 183~199
Ham100 GACCAACTCCAAAGCTAGCA

GGTAACATGCTCTCGACCTT

58 8 244~262
Ham26 GCAAATTCGTGAAGCATTCC

AACAGTTGGATGAGTTCCAG

59 8 182~206

A.2.3       用于检测实验长爪沙鼠遗传质量的微卫星位点为28个,各微卫星位点的名称、引物序列、等位

基因数、等位基因范围和退火温度按照表A.3的规定执行。

表A.3   实验长爪沙鼠微卫星位点的引物序列、退火温度、等位基因数及等位基因分布范围

位点 引物序列(5´~3´) 退火温度(℃) 最大等位基因数 等位基因分布范围
AF200942 CAGGCACCCCCAGTTT

GTCTACACAGGCTGAGGATGT

54 15 180~215
AF200943 GGCTCCTGATTCTACATTTCT

CAACCATTGGCAACTCTC

57 17 154~181
AF200944 GCTGGGCTTTAATGTTTATTT

GGTGGCTCACACTTTCTGT

54 19 113~134
AF200946 TTTCTGGGGTCTCTTTCTCTC

CCATTCTGCAAGACTCCTCT

57 28 195~242
AF200945 AGTCCCTATTACATCCACAAG

TTATCCTGCAAAGCCTAAG

57 12 166~186
AF200941 TGGGTCCTTTGGAAGA

TGGCTTAAAATGAATCACTTA

55 24 115~153
AF200947 GACAGAGTGGGAGGGGTATGT

TGGCAAGTTTGGTTTGTTTGA

55 17 188~212
D16Mit7 CTGCCACCCCTGAACCATTA

CTACAAGATGTGGGGCATGA

52.6 15 480~529
D16Mit26 CAGGAATAAAGTATAATGGGGTGC

CCCATGATCAGTTGGGTTTT

49.1 9 207~266

表 A.3   实验长爪沙鼠微卫星位点的引物序列、退火温度、等位基因数及等位基因分布范围(续)

位点 引物序列(5´~3´) 退火温度(℃) 最大等位基因数 等位基因分布范围
D1Mit362 TGTGTGACTGCTTGGAAGATG

CTGAGTCCCTAAAGTTGTCCTTG

50.0 16 476~504
D8Mit184 GTTTTTCTCAGAAGAATGCAATATACC

TGAGAAGAATGAGGAATTTGTCC

48.1 11 196~229
D7Mit33 TCTGAAGTTTGAATGGTTGTGG

TTTCAAAATCGTGTCATTTTGC

47.3 15 376~394
D6Mit37 AAAGAATTGCACATCCACTGG

TGCCCAGGATGTTTAAGAGG

47.0 14 246~265
D5Mit31 TCAGGGCTCTCTAAGGGACA

ACTATGCAGCCACCAAATCC

53.1 9 318~350
D12Mit201 CCACTGGATGGCAACAGAC

TATGTGTTTCAAAACCACACTCG

53.1 18 245~283
D2Mit22 GCTCCCTTTCCTCTTGAACC

GGGCCCTTATTCTATCTCCC

49.1 9 173~192
D15Mit124 AGGAGAGAACCAACTGCTGC

GGCCAGTGATGACTTTATAATGC

59.8 17 232~258
D11Mit36 CCAGAACTTTTGCTGCTTCC

GTGAGCCCTAGGTCCAGTGA

58.7 15 234~256
D7Mit71 CCACCTGGAATACATGTAACCC

TAAGATCCAAGAGATGGGTTAAGC

49.1 11 165~200
D2Mit76 CTCAAGTCTCACTTCTCTGCACA

ACACCCAAGGTTGACCTCTG

47.3 19 281~328
D3Mit130 AACACATGAAACGTGTGCGT

TGATAGGCATGCTTAAGCCC

50.6 11 213~251
D19Mit1 AATCCTTGTTCACTCTATCAAGGC

CATGAAGAGTCCAGTAGAAACCTC

49.1 15 133~165
D11Mit35 AGTAACATGGAACATCGACGG

TGCTCAGCTCTGGAGTGCTA

48.1 13 287~307
D17Mit38 CCTCTGAGGAGTAACCAAGCC

CACAGAGTTCTACCTCCAACCC

52.6 14 195~251
DXMit17 CCTGTTTGGGCACCTAGATT

TAATAACCCATGTTTTCTGTGGG

48.1 9 234~251
D8Mit56 ACACTCAGAGACCATGAGTACACC

GAGTTCACTACCCACAAGTCTCC

50.6 9 100~126
D10Mit66 TCTCCTTGGAATTCACAGCC

GACATTCCTTAAGAGAGACAGTCC

54.7 14 272~298
D13Mit1 TCATTCAACATTCTGTCAATCG

CACAACAAGGTTAACCTCTAGACA

49.0 14 104~132

A.2.4       用于检测封闭群实验雪貂遗传质量的微卫星位点为21个,各微卫星位点的名称、引物序列、重复等位基因数按照表A.4的规定执行。

表A.4   实验雪貂微卫星位点的引物序列、等位基因数及等位基因分布范围

位点 引物序列(5´~3´) 等位基因分布范围 重复等位基因数
Mpu

A4w1

CACTTCCTCCCATGGACACT

CAAAGTCTCCCACCCTATGC

152~174 (AC)23
Mpu

A10w4

TGGCCTATATGTGCAGATGAC

TGTTTGTCTTGTACCCTCTGACC

154~158 (AC)13(AC)7
Mpu

A121w7

ACTGCCATCAGGTCATCTAGG

GGGTAGACACCTGGCTCAAG

105~129 (CA)14
Mpu

A129w7

GGCCTCTGAACACATAGTTG

AAGTACAGAATGGAAGGATCTG

197~205 (CA)13
Mpu

A212w1

CCCTATGAGGGCATGTTTGT

CTGCCATGTTTCCACTGGT

137~153 (TG)13
Mpu

A223w3

GAAGACAGCACCCCAGAGTC

T GGTTGCCAAGAACTAGCAG

213~239 (GT)19
Mpu

A229w4

GGGTAGGACGTGCTTAAAGATG

AGCCCTCAAAGCCTCTTCTC

107~139 (GT)11(TG)7
Mpu

A231w6

CCTCTGGTAACCATCTGTTTG

TCTTCAAGATGTTCAGTGTGGA

182~224 (GT)15
Mpu

B1w4

TCCACTACCTGGCCTCATTC

ACCTCAGGCTCCACTCTCAG

178~190 (CT)15(CA)8

(AC)5(AC)11

Mpu

B6w2

T GGGTGTAGAGCATGTTTGG

TGCCTATTCCAGGTACCTCAT

156~164 (TC)18
Mpu

B9w7

CGTTACCAACTGTGGCTGTG

TGCCTGGGCCTGTGATTA

180~192 (GA)18
Mpu

B12w3

AGTCGACAGATGAGTCCACGAAG

TGTCACACATGGCAGGATCT

175~179 (AG)11(AC)8(AC)7
Mpu

B112w5

CCATTACAAGTGCTTGGAGACA

TGGAACATGCTGGAAATTGT

161~165 (AG) 14
Mpu

B202w3

TCTCCTCCTCCTCCTCCTTC

ATGAGATTGACCGTGCATCA

164~168 (CTC)5(GA)14
Mpu

B209w2

TGCTTCTCCCTCTGACTGCT

CCGCCCAAGTATCCCTAAAT

119~125 (CT)16
Mpu

B217w3

TTCCCTGCTTGTGCTCTCTT

TGGGGTAAGGGTAGGTATGC

126~144 (TC)5(TC)17
Mpu

C4w7

CTGGCCCTATCACATACATATTCA

GGAAGTATACTCATGCCTGCAA

147~163 (TCCA)9
Mpu

C102w3

GGGTGGATGGGTGAGTAGGTA

CCTTCCCACATTCCATCCTT

119~135 (TGGA)7

表 A.4   实验雪貂微卫星位点的引物序列、等位基因数及等位基因分布范围(续)

位点 引物序列(5´~3´) 等位基因分布范围 重复等位基因数
Mpu

D207w5

CAGGTGAAGAAGTCCCTCTGT

CTTGGTTCTGACCATTTGGA

188~214 (CT)10(ATAG)7
Mpu

D209w4

GAACAGCAAGTAGTCCAACTCTCA

GTTGGATCCTTTCCATCACC

165~185 (TATC)7
Mpu

D231w2

TTTGGGTTCCACAGTAGGTG

ATGCTCTCAATCCATGCTCA

132~160 (GATA)9

A.2.5       用于检测实验猫遗传质量的微卫星位点为37个,各微卫星位点的名称、染色体位置、引物序列、

退火温度按照表A.5的规定执行。

表A.5   实验猫微卫星位点的扩增条件和染色体分布

位点 引物序列(5´~3´) 染色体 Mg2+浓度(mM) 退火温度(℃)
FCA123 CTTCACACTGCGAGAGGACT

TCTGACAGGCTCCAGGTTACT

A1 1.5 57
FCA1062 CTTCACACTGCGAGAGGACT

TCTGACAGGCTCCAGGTTACT

A1 1.5 58
FCA522 GTTTGAAATTATGGCTTCCCAACT

TCTGGAGAACAAGAGGGAAAAGT

B1 1.5 54
FCA275 TCACTCCTGGACTTAACCATCAG

TGCTATTGACGAAGGGGCAG

B2 1.5 57
FCA848 CTCCTTCACCAAAGGCTGGAT

GGACATTCTGGAAATGCGGAG

B3 1.5 57
FCA664 AGAAAAATGACTACCGACATGGTT

GAGTGCGGCTACTATCTGGG

C1 1.5 56
FCA346 AATGCCTAGGTAGCACTGTCC

CCCAAGTCACCCTCCTGTTG

C2 1.5 58
FCA920 CTAGTTGAAGGGGCCAGCAC

TCTGTCCAGCCCATAGGTGT

D1 1.5 59
FCA221 TGGCCCATTAAGCAAGAAGGT

TGGCTATGCCAGCAGTTGAA

D3 1.5 57
FCA1014 CTGGCAAGAAGTCCACTGGG

CATGGCTCCTGAGGTCATGT

E3 1.5 58
FCA1015 CTCCAGTGCCCATACGTTGT

TGGCCACAAAGATGGTTGTTC

E3 1.5 57
FCA1016 GTCACTAAGTGGTGACAGAGCA

AACGTTTGAAAGGTGTGCCT

F1 1.5 56
FCA1030 CGCCCGCAAAAAGACTCAAG

GGACGCCCACTAGCCAAATA

F1 1.5 58
FCA1315 CCTGCATCAGTTGATTCCTTGT

GGACCATCAGAATGCAGCTC

F2 1.5 58

表 A.5   实验猫微卫星位点的扩增条件和染色体分布(续)

位点 引物序列(5´~3´) 染色体 Mg2+浓度(mM) 退火温度(℃)
FCA823 AGGGTGTGCTAGAACTAGCTGG

CATTTAGAGGTTCAGGACTGGG

B1 1.5 58
FCA770 TCAAGAGTCTTTGCTCAAGGG

TTTACTTAGGACTGACAGGGCA

A1 1.5 56
FCA559 GCCAAAATGTTCAAGAGTGG

TTTTGGCTTGATGAGCATCA

B1 1.5 55
FCA976 TCCATTTACCTGGGAAATTCC

ACCCTCATGTCTTGGCAATC

D4 1.5 55
FCA1240 TCCTGATGTGGCAGTTAAACC

GCATGCCTTGAACCTTTCAT

D2 1.5 58
FCA176 GGAAACTTGGAAAGCAAAACC

TCCACAGTTGGAGTTCTTAAGG

A1 1.5 58
FCA045 TGAAGAAAAGAATCAGGCTGTG

GTATGAGCATCTCTGTGTTCGTG

D4 1.5 58
FCA723 TGAAGGCTAAGGCACGATAGA

CGGAAAGATACAGGAAGGGTA

A1 1.5 58
FCA085 GGTCCTCACGTTTTCCT

ATGTCTGTATGAGATGCGGT

E2 1.5 58
FCA084 TAGGTGAATGTTGGGATTTATGG

AACTGAAGACCAAATTGATGAG

A1 1.5 55
FCA210 TGAGCCACCTAGGCACTCTT

AGAAGCATCCAGTGACAATGG

B4 1.5 59
FCA453 AATTCTGAGAACAAGCTGAGGG

ATCCTCTATGGCAGGACTTTG

A1 1.5 60
FCA672 AAGTTGCTTGCACACACTGC

TCCAAGAGCCTTTTCAGTTAGG

F2 1.5 60
FCA1056 GGTGTGAGGGCCTATTCTGA

GGATGTCTCCCTTGACTGGT

B4 1.5 58
FCA1239 AAAAGCCCTGACACCCAAG

CTTGACCTTAATTGCTCATTGG

D2 1.5 58
FCA700 CCCTTAAAATCGCAGCTCTG

AATCCAAGGAAAACAGGCCT

B1 1.5 58
FCA742 TCAATGTCTTGACAACGCATAA

AGGATTGCATGACCAGGAAC

D4 1.5 56
FCA678 TCCCTCAGCAATCTCCAGAA

GAGGGAGCTAGCTGAAATTGTT

A1 1.5 56
FCA096 CACGCCAAACTCTATGCTGA

CAATGTGCCGTCCAAGAAC

E2 1.5 58

表 A.5   实验猫微卫星位点的扩增条件和染色体分布(续)

位点 引物序列(5´~3´) 染色体 Mg2+浓度(mM) 退火温度(℃)
FCA075 ATGCTAATCAGTGGCATTTGG

GAACAAAAATTCCAGACGTGC

E2 1.5 58
FCA149 CCTATCAAAGTTCTCACCAAATCA

GTCTCACCATGTGTGGGATG

B1 1.5 58
FCA220 CGATGGAAATTGTATCCATGG

GAATGAAGGCAGTCACAAACTG

F2 1.5 58
FCA229 CAAACTGACAAGCTTAGAGGGC

GCAGAAGTCCAATCTCAAAGTC

A1 1.5 58

A.2.6       用于检测实验鸡遗传质量的微卫星位点为29个,各微卫星位点的名称、引物序列、等位基因数和等位基因范围按照表A.6的规定执行。

表A.6   实验鸡微卫星位点的引物序列、退火温度、等位基因数及等位基因分布范围

位点 引物序列(5´~3´) 退火温度(℃) 最大等位基因数 等位基因

分布范围

MCW0029 GTGGACACCCATTTGTACCCTATG

CATGCAATTCAGGACCGTGCA

63.8 8 139~188
ADL0293 GTAATCTAGAAACCCCATCT

ACATACCGCAGTCTTTGTTC

53.9 6 106~120
ADL0317 AGTTGGTTTCAGCCATCCAT

CCCAGAGCACACTGTCACTG

58.5 8 177~219
GCT0016 TCCAAGGTTCTCCAGTTC

GGCATAAGGATAGCAACAG

52.2 6 111~148
ADL0304 GGGGAGGAACTCTGGAAATG

CCTCATGCTTCGTGCTTTTT

53.9 7 138~161
LEI0074 GACCTGGTCCTGACATGGGTG

GTTTGCTGATTAGCCATCGCG

58.5 6 221~243
ADL328 CACCCATAGCTGTGACTTTG

AAAACCGGAATGTGTAACTG

53.9 5 107~120
GGANTECl GCGGGGCCGTTATCAGAGCA

AGTGCAGGGCGCTCCTGGT

65.0 7 139~194
LEI0094* CAGGATGGCTGTTATGCTTCCA

CACAGTGCAGAGTGGTGCGA

56.0 7 176~211
MCW0330 TGGACCTCATCAGTCTGACAG

AATGTTCTCATAGAGTTCCTGC

58.5 6 217~287
LEI0141 CGCATTTGATGCATAACACATG

AAGGCAAACTCAGCTGGAACG

52.2 5 221~245
MCW0087 ATTTCTGCAGCCAACTTGGAG

CTCAGGCAGTTCTCAAGAACA

58.5 9 268~289

表 A.6   实验鸡微卫星位点的引物序列、退火温度、等位基因数及等位基因分布范围(续)

位点 引物序列(5´~3´) 退火温度(℃) 最大等位基因数 等位基因

分布范围

MCW0347 GCTTCCAGATGAGCTCCATGG

CACAGCGCTGCAGCAACTG

52.0 3 121~149
ADL176 TTGTGGATTCTGGTGGTAGC

TTCTCCCGTAACACTCGTCA

58.5 9 183~200
ADL0201 GCTGAGGATTCAGATAAGAC

AATGGCYGACGTTTCACAGC

58.5 7 111~151
GGNCAMZO GTCACTAGGTTAGCAGCATG

GCTGGATACAGACCTCGATT

56.0 1 234
GGAVIR AGAGATGGTGCACGCAACCT

CGAGCACTTTCTGGCAGAGA

60.7 3 86~89
MCW0063 GGCTCCAAAAGCTTGTTCTTAGCT

GAAAACCAGTAAAGCTTCTTAC

53.9 8 116~149
ADL185 CATGGCAGCTGACTCCAGAT

AGCGTTACCTGTTCGTTTGC

58.5 9 116~142
GGMYC CGAGGCGCTCTGCGAGTTTA

TGGGGACCTCTGGCTCTGAC

62.4 5 139~151
LEI0094 GATCTCACCAGTATGAGCTGC

TCTCACACTGTAACACAGTGC

53.9 6 250~283
GGVITC AGCCATCATTCAGGGCATCT

GATGTCCTGAGTGATGCTCA

58.5 2 86~90
ADL0292 CCAAATCAGGCAAAACTTCT

AAATGGCCTAAGGATGAGGA

58.5 6 110~136
GGVITIIG* GGCAGGTTTCTAATGCCTGA

CCCATCGTTTCAACTGTATG

56.0 2 186~189
ADL166 TGCCAGCCCGTAATCATAGG

AAGCACCACGACCCAATCTA

58.5 6 131~154
MCW0014 AAAATATTGGCTCTAGGAACTGTC

ACCGGAAATGAAGGTAAGACTAGC

58.5 9 172~195
GGCYMA* AGCGAGGCGCTCTGCGAGTT

GGGCACCTCTGGCTCTGACC

64.6 5 140~153
MCW0402 ACTGTGCCTAGGACTAGCTG

CCTAAGTCTGGGCTCTTCTG

56.0 15 141~229
STMSGGHU2-1A CTTAATATGTGTGAGGTGGC

GTTCTCACAATTGCATTAGC

53.9 2 235~238

A.2.7       用于检测实验鸭遗传质量的微卫星位点为29个,各微卫星位点的名称、引物序列、等位基因数和等位基因范围按照表A.7的规定执行。

表A.7   实验鸭微卫星位点的引物序列、退火温度、等位基因数及等位基因分布范围

位点 引物序列(5´~3´) 退火温度(℃) 最大等位基因数 等位基因

分布范围

APL2 GATTCAACCTTAGCTATCAGTCTCC

CGCTCTTGGCAAATGTCC

58.5 4 115~125
APL579 ATTAGAGCAGGAGTTAGGAGAC

GCAAGAAGTGGCTTTTTTC

55 7 118~227
APH09 GGATGTTGCCCCACATATTT

TTGCCTTGTTTATGAGCCATTA

58 8 93~188
APH11 GGACCTCAGGAAAATCAGTGTA

GCAGGCAGAGCAGGAAATA

58.5 2 183~185
APH18 TTCTGGCCTGATAGGTATGAG

GAATTGGGTGGTTCATACTGT

58 3 179~324
AY258 ATGTCTGAGTCCTCGGAGC

ACAATAGATTCCAGATGCTGAA

58.1 9 90~161
AY264 GCAGACTTTTACTTATGACTC

CTTAGCCCAGTGAAGCATG

58.1 11 112~328
AY314 CTCATTCCAATTCCTCTGTA

CAGCATTATTATTTCAGAAGG

50.3 3 135~250
CAUD001 ACAGCTTCAGCAGACTTAGA

GCAGAAAGTGTATTAAGGAAG

55.5 2 234~390
CAUD002 CTTCGGTGCCTGTCTTAGC

AGCTGCCTGGAGAAGGTCT

60.8 4 175~231
CAUD004 TCCACTTGGTAGACCTTGAG

TGGGATTCAGTGAGAAGCCT

60.8 3 162~290
CAUD005 CTGGGTTTGGTGGAGCATAA

TACTGGCTGCTTCATTGCTG

60.8 3 180~300
CAUD006 ATGGTTCTCTGTAGGCAATC

TTCTGCTTGGGCTCTTGGA

63.5 8 183~248
CAUD007 ACTTCTCTTGTAGGCATGTCA

CACCTGTTGCTCCTGCTGT

60.8 6 100~208
CAUD010 GGATGTGTTTTTCATTATTGAT

AGAGGCATAAATACTCAGTG

50.3 9 180~300
CAUD011 TGCTATCCACCCAATAAGTG

CAAAGTTAGCTGGTATCTGC

50.3 6 137~222
CAUD012 ATTGCCTTTCAGTGGAGTTTC

CGGCTCTAAACACATGAATG

63.5 9 182~286
CAUD014 CACAACTGACGGCACAAAGT

CTGAGTTTTTCCCGCCTCTA

58.1 3 136~200
CAUD026 ACGTCACATCACCCCACAG

CTTTGCCTCTGGTGAGGTTC

60.8 9 134~196

表 A.7   实验鸭微卫星位点的引物序列、退火温度、等位基因数及等位基因分布范围(续)

位点 引物序列(5´~3´) 退火温度(℃) 最大等位基因数 等位基因

分布范围

CAUD027 AGAAGGCAGGCAAATCAGAG

TCCACTCATAAAAACACCCACA

66 5 100~180
CAUD028 TACACCCAAGTTTATTCTGAG

ACTCTCCAGGGCACTAGG

55.5 8 153~220
CAUD031 AGCATCTGGACTTTTTCTGGA

CACCCCAGGCTCTGAGATAA

51.4 10 140~187
CAUD032 GAAACCAACTGAAAACGGGC

CCTCCTGCGTCCCAATAAG

58.1 9 96~206
CAUD034 TACTGCATATCACTAGAGGA

TAGGCATACTCGGGTTTAG

55.5 9 160~296
CAUD035 GTGCCTAACCCTGATGGATG

CTTATCAGATGGGGCTCGGA

63.5 7 174~282
CMO211 GGATGTTGCCCCACATATTT

TTGCCTTGTTTATGAGCCATT

55 7 112~205
CMO212 CTCCACTAGAACACAGACATT

CATCTTTGGCATTTTGAAG

58 3 186~272

A.2.8       用于检测实验鹅遗传质量的微卫星位点为14个,各微卫星位点的名称、引物序列、等位基因数和等位基因范围按照表A.8的规定执行。

表A.8   实验鹅微卫星位点的引物序列、退火温度、等位基因数及等位基因分布范围

位点 引物序列(5´~3´) 退火温度(℃) 最大等位基因数 等位基因

分布范围

Ans02 TTCTGTGCAGGGGCGAGTT

AGGGAACCGATCACGACATG

58 7 202~230
Ans07 GACTGAGGAACTACAATTGACT

ACAAAGACTACTACTGCCAAG

58 6 236~246
Ans02 TTCTGTGCAGGGGCGAGTT

AGGGAACCGATCACGACATG

58 7 202~230
Ans07 GACTGAGGAACTACAATTGACT

ACAAAGACTACTACTGCCAAG

58 6 236~246
Ans17 ACAAATAACTGGTTCTAAGCAC

AGAGGACTTCTATTCATAAATA

54 4 111~123
Ans18 GTGTTCTCTGTTTATGATATTAC

AACAGAATTTGCTTGAAACTGC

58 3 229~237
CKW47 AACTTCTGCACCTAAAAACTGTCA

TGCTGAGGTAACAGGAATTAAAA

62 6 211~221
APH13 CAACGAGTGACAATGATAAAA

CAATGATCTCACTCCCAATAG

55 4 163~178

表 A.8   实验鹅微卫星位点的引物序列、退火温度、等位基因数及等位基因分布范围(续)

位点 引物序列(5´~3´) 退火温度(℃) 最大等位基因数 等位基因

分布范围

APH20 ACCAGCCTAGCAAGCACTGT

GAGGCTTTAGGAGAGATTGAAAAA

60 13 135~155
Bca μ5 AGTGTTTCTTTCATCTCCACAAGC

AGACCACAATCGGACCACATATTC

62 4 197~201
Bca μ8 CCCAAGACTCACAAAACCAGAAAT

ATGAAAGAAGAGTTAAACGTGTGCAA

58 7 155~164
TTUCG1 CCCTGCTGGTATACCTGA

GTGTCTACACAACAGC

58 3 113~115
G-Ans25 CACTTATTAATGGCACTTGAAA

GTTCTCTTGTCACAACTGGA

62 4 224~270
G-Hhiμ1b¶ ATCAAAGGCACAATGTGAAAT

AGTAAGGGGGCTTCCACC

60 6 163~221
G-Bcaμ7 TAGTTTCTATTTGCACCCAATGGAG

TAGTTTCTATTTGCACCCAATGGAG

60 6 164~174
G-CAUD006 ATGGTTCTCTGTAGGCAATC

TTCTGCTTGGGCTCTTGG

56 13 152~210

A.2.9       用于检测实验鸽遗传质量的微卫星位点为16个,各微卫星位点的名称、引物序列、等位基因数和等位基因范围按照表A.9的规定执行。

表A.9   实验鸽微卫星位点的引物序列、退火温度、等位基因数及等位基因分布范围

位点名称 引物序列(5′~3′) 退火温度(℃) 最大等位基因数 等位基因

分布范围

UU-Cli02 TGGGCAAGGTACACTTTTAGGT

CTTTATGCTCCCCCTTGAGAT

61 4 158~170
UU-Cli06 TTTGAAAAACATGGATTGTGC

AATTTGCAGAGGGTGAGTGG

56 4 140~145
PG5 GTTCTTGGTGTTGCATGGATGC

AGTTACGAAATGATTGCCAGAAG

59 2 262~266
C26L9(1265223) CAAAGCTGCTGACGTGAATCAA

AGAGACGCTCCATGCAAAAG

59 4 467~472
UU-Cli14 CAGAACGTTTTGTTCTGTTTGG

TCTTGCTGCAGTCTTCATCC

58 5 265~292
C12L1(532572) GTTGTTTGGCTGAGTGGACG

TCAACCAGGGGAATTGGCAG

62 3 126~136
C12L4(906353) GCTGCTGTCTTCTTCATTGGG

TTAAAACCTCCCGTCTCCCTG

60 5 210~250
CliµD11 CCAATCCCAAAGAGGATTAT

ACTGTCCTATGGCTGAAGTG

58 4 78~98

表 A.9   实验鸽微卫星位点的引物序列、退火温度、等位基因数及等位基因分布范围(续)

位点名称 引物序列(5′~3′) 退火温度(℃) 最大等位基因数 等位基因

分布范围

C26L10(1404758) GCTGTCAGGTATCAGCCACAA

TCAGACCCACGAAAGCTGTAA

59 7 211~226
C26L4(568923) CAACCCCATGTGGGTGAGAC

CACCACCACGTGGGACATC

63 6 357~432
PG4 CCCATCTCCTGCCTGATGC

CACAGCAGGATGCTGCCTGC

64 4 136~170
UU-Cli12 CGCCAGACTGTATTGTGAGC

AGCATGGCTGTTCTTTGAGG

61 9 231~265
CliμT47 ATGTGTGTTTGTGCATGAAG

ATGAAAGCCTGTTAGTGGAA

56 5 183~214
CliμD32 GAGCCATTTCAGTGAGTGACA

GTTTGCAGGAGCGTGTAGAGAAGT

60 6 136~158
UU-Cli07 GCTGCCTGTTACTACCTGAGC

CTGGCCATGAAATGAACTCC

61 4 277~310
C26L1(20390) AGGAGCCTACACTGGGTTTTC

TGTAGCTCTGCAATCAGCCT

60 4 250~268

A.2.10       用于检测实验斑马鱼和实验剑尾鱼遗传质量的微卫星位点为5个以上,常用实验斑马鱼品系微卫星分子标记的遗传特征按照表A.10的规定执行。

表A.10   常用实验斑马鱼微卫星分子标记的遗传特征

引物名称 位点 引物序列(5’~3’) 品系片段长度(bp)
AB TU LF WIK 本地短尾

Z24

LG15

CACCTTCACGGTGAGTAGCA

GTGGAATGGTGTGACTAATGTCA

150

150

150

Z928

LG18

CAGTCCAGGCTGAACATTCA

ACACCTTCGGCAGTTTTCAC

134,94

134,126

Z1059

LG7

AACAGGTGACAGAGCACACG

GGGAGAGGGCAGGACAATAT

150/122

150/122

Z1265

LG6

ATATGTGCTGCTCATGATGAGT

AACAGACGAAGGGTGAAGGA

90~110bp

90~110bp

Z1637

LG8

GGCTTTTGGATGAAGGTTGAGC

GGAATCACAATGGCAGCAGA

143,105

133,103

Z3725

LG3

ACTAAATCGCACTTCAGCAGCG

GGTGTCCTCACATCAGCTGCA

262,256,

248

248

Z3782

LG19

AATTCTGGGGGGTAATTCTGGC

AAGGGGGCTAAACCTTCAACTG

200,90 170 120 90

表 A.10   常用实验斑马鱼微卫星分子标记的遗传特征(续)

引物名称 位点 引物序列(5’~3’) 品系片段长度(bp)
AB TU LF WIK 本地短尾

Z4299

LG5

AGGAATGCGCTATGGGACGA CACATCTGCCACTGAACCGG 370,260,

230

260,230

280,260 300,

260,

190

Z5223

LG15

AACAGAGCCGATCTGCCACC

AGCACAGCGGAGGAAATAAAGC

178,150

178,150

Z9384

LG19

CCGACTGGAGAAGACCTGAG AGCATAATCAGACAACCGGG 134,177,

190,134,

177,190

134 ,

177,190

134 ,

177,190

134 , 177 ,

190 , 134 ,

177,190

A.2.11       用于检测封闭群实验树鼩遗传质量的微卫星位点为10个,各微卫星位点的名称、引物序列、P CR反应的退火温度、镁离子浓度按照表A.11的规定执行。

表A.11   实验树鼩微卫星位点的名称、引物序列、PCR 反应的退火温度、镁离子浓度

位点 引物序列(5´~3´) 等位基因分布范围

(bp)

等位基因数 退火温度

(℃)

Mg2+浓度

(mM)

TBC16 CCATCCTGACTACTGCTTAC

AGGGCTACTTTATAGGTTTC

135-167 7 51 1.5
TBC19 AGGGAACCAAATGAACAA

GTCACCGAAGTCACAACC

196-208 6 58 1.5
TBC23 GCTTTGTCACTTTCCTTCCCTA

TGCGCTCGTGGCTATTTT

166-262 16 55 2.0
TBC25 TGTCTCCCTGGTCATATT

GTGCTCTTCTCAGCGTTT

386-426 8 59 2.0
TBC26 CATCCCTGAATCCAAGCC

CACCAGCAAGGTAACTCC

206-236 6 55 1.5
TBC27 GTTAAGGCACTGGACATT

GTGAACCCACAAATAATCTA

220-246 3 57 1.5
TB6 AGACAGAATGCAAGAAATCAC

ATGTGCAATGTAATAGTTCCAG

418-432 4 56 1.5
TG4 TGAAAACTGGCAATTCATATGC

CAATCCTTTTTCGTTAGTTTTGTG

134-152 4 57 1.5
JS22 CAATGTCCTGGTGGTTATGG

GAAGTGGTCACTCTGCAATCC

149-168 7 58 1.5
JS188 ACACACACAAAACTCATTTTATCC

TCTACACGAATGTGCCAACC

182-190 5 58 1.5

A.3     PCR扩增

A.3.1       PCR扩增的体系

PCR总反应体积为15μL,其中含10×PCR buffer:1.5μL,上下游引物(100 pmol/μL) 各1μL, 4×dNTP 100 μmol/L:1μL ,Taq 酶1U:1μL ,50 ng~100 ng 基因组DNA:1μL ,纯水(ddH2O) :8.5μL。 PCR反应程序为:95 ℃预变性,4 min;94 ℃变性,30 s;退火温度(各位点序列、PCR反应条件见表 A.1~A.10),30 s;72 ℃延伸,30 s;35个循环;72 ℃继续延伸7 min;扩增产物4 ℃保存。

A.3.2       PCR产物的凝胶检测

PCR产物经1.5%的琼脂糖凝胶电泳以及凝胶成像系统拍照。

A.3.3       扩增产物的STR扫描

扩增产物经过琼脂糖凝胶电泳检测确保扩增出目的片断后,选择分别以FAM、HEX、TAMRA标记的三

个位点的扩增产物,以1:3:5体积比混合,取1μL上样进行STR扫描。

A.4     STR扫描结果的判读与统计分析

扫描结果可出现两种波形:一种为纯合基因型,只有一个主波;另一种为杂合基因型,有两个主波。

由群体遗传分析软件读出每个样本在每个微卫星位点的扩增片断大小。每个位点的等位基因根据扩

增片断从小到大顺序排列记录为a,b,c,d等。

A.4.1       数据统计分析

将所有样本的每个微卫星位点的基因型以ab,bb等形式运用软件的数据文件,计算样品在各微卫星位点上的基因频率、平均观察等位基因数、平均有效等位基因数(Ne)、香隆指数、平均杂合度(H)等。

A.5     实验结果

A.5.1       实验种群

A.5.1.1         实验狨猴和实验猫

实验狨猴和实验猫采用群体平衡状态方法进行评价。按照哈代-温伯格(Hardy-Weiberg)定律,根据各位点的等位基因数计算封闭群的基因频率,进行卡方(chi-square  test)检验。当群体达到平衡状态,该群体判为合格,否则判为不合格。

A.5.1.2         实验雪貂

实验雪貂采用群体平均杂合度进行评价,当群体平均杂合度在0.5~0.7时,该群体判为合格,否则

判为不合格。

A.5.2       封闭群

封闭群实验长爪沙鼠、实验鸡、实验鸭、实验鹅、实验鸽、实验小型猪、实验鱼(斑马鱼和剑尾鱼)和实验树鼩采用平均杂合度进行评价,当群体平均杂合度在0.5~0.7时,该群体判为合格,否则判为不合格。

A.5.3       近交系

A.5.3.1         实验小型猪

所有样品检测位点的等位基因都符合品系的特征,按照表A.12~A.14的规定执行,没有新的等位基因出现为合格实验小型猪近交系,否则判为不合格。

表A.12   近交系五指山小型猪近交系培育过程中遗传质量控制的微卫星座位及优势等位基因

位点 等位基因及频率 频率合计
CGA 片段 189 199 203 293
频率 0.023 0.872 0.023 0.081 1.000
SW769 片段 105 129
频率 0.093 0.907 0.97
SW857 片段 150 158
频率 0.163 0.837 1
S0355 片段 0.75 0.138
频率 106 114 0.888
SW72 片段 106 114
频率 0.588 0.238 0.825
S0090 片段 241 247
频率 0.756 0.012 0.756
S0218 片段 173 179 181
频率 0.012 0.547 0.419 0.547
SW24 片段 104
频率 0.631 0.631

表A.13   近交系广西巴马小型猪和培育过程中遗传质量控制的微卫星座位及优势等位基因

位点 等位基因及频率 频率合计
CGA 片段 271 277 297
频率 0.49 0.281 0.229 1
SW769 片段 123 127
频率 0.194 0.806 1
SW857 片段 146 154
频率 0.146 0.573 0.719
S0005 片段 216 226
频率 0.223 0.66 0.883
SW240 片段 94 98 104
频率 0.531 0.333 0.115 0.979
S0355 片段 258 260 262
频率 0.083 0.427 0.427 0.854
SW72 片段 110 120
频率 0.698 0.083 0.781
S0090 片段 241 243 247 249
频率 0.032 0.117 0.489 0.117 0.606

表 A.13   近交系广西巴马小型猪和培育过程中遗传质量控制的微卫星座位及优势等位基因(续)

位点 等位基因及频率 频率合计
S0218 片段 167 173 179 187
频率 0.115 0.74 0.125 0.021 0.854
SW24 片段 102 104
频率 0.75 0.021 0.75

表A.14   近交系贵州小型猪培育过程中遗传质量控制的微卫星座位及优势等位基因

位点 等位基因及频率 频率合计
CGA 片段 271 283 285 305
频率 0.011 0.136 0.364 0.295 0.795
SW769 片段 105 121 129 133 139 145
频率 0.291 0.267 0.093 0.151 0.081 0.116 0.907
SW857 片段 156 160 166
频率 0.167 0.452 0.202 0.821
S0005 片段 202 204 214
频率 0.558 0.244 0.186 0.988
SW240 片段 96 102
频率 0.227 0.182 0.409
S0355 片段 252 254 272 274
频率 0.183 0.098 0.11 0.341 0.732
SW72 片段 102 112 118
频率 0.17 0.625 0.045 0.841
S0090 片段 247 249 253
频率 0.045 0.58 0.375 0.955
S0218 片段 181 187 195 197
频率 0.151 0.186 0.023 0.5 0.709
SW24 片段 100 104 108 112
频率 0.114 0.114 0.216 0.136 0.466

A.5.3.2         实验鱼

近交系实验鱼(斑马鱼和剑尾鱼)检测结果判定按照表A.15的规定执行。

表A.15   近交系实验鱼检测结果判定

检测结果 判          断 处          理
与标准参考位点完全一致 未发现遗传变异,遗传质量合格

有一个位点的分子与标准参考位点不一致

可疑

增加检测位点数目和增加检测方法后重检,确实只有一个标记基因改变可命

名为同源突变系

两个或两个以上位点的标记基因与标准参

考位点不一致

不合格 淘汰,重新引种

A.6     结果报告

根据判定结果对实验动物群体出具遗传质量检测报告。

附   录   B

(规范性)

实验斑马鱼 SNP 遗传标记的检测方法

B.1     基因组DNA的提取

基因组DNA提取方法按照NY/T 1673的规定执行。

B.2     PCR扩增

按照附录A中A.3.1的方法进行。

B.3     SNP标记的检测

取10  μLPCR产物用25  μL的水稀释,并用枪头吹打混匀。然后取1  μL为模板,用表B.1中的引物

进行PCR扩增和产物测序,最后使用PolyPhred 程序软件分析SNP标记的测定结果。

B.4     SNP分子标记的选择及特征

选择位于近交系斑马鱼25对染色体、剑尾鱼24对染色体上的10个以上位点,作为遗传检测的SNP标记。SNP分子标记的名称及常用近交系斑马鱼的SNP分子标记的特征符合表B.1的要求。

表 B.1 常用实验斑马鱼品系 SNP 分子标记位点

染色体:位点 SNP ID AB TU 引物(5´~3´) dbSNP ID

01:018595529

DS043503-5

T

C

GGCGATTCCTACAATTCTTC GAAAGTCCTGTGTTGAAGGTG ss49838906

01:049159399

DS036502-3

G

C

GGCACATCGTCATATAATGC ACAATACTGGAATGACACTGG ss49838640

02:025012321

DS042554

A

G

GAAGTCCATGTTGGCATCTAC AGTGTTGAGAAACGGTCAGG ss49824928

02:027720831

DS040180-3

T

G

AACACTGGCACGTACACAAG GGGAATCGTGAACTCGTAAC ss49838788

03:048073042

DS032197-8

A

T

TCATTGTAATAGCAGTAATGACG TGCAATGTTTGTTTCAGACC ss49838454

03:048073049

DS032197-7

G

A

TCATTGTAATAGCAGTAATGACG TGCAATGTTTGTTTCAGACC ss49838453

表 B.1 常用实验斑马鱼品系 SNP 分子标记位点(续)

染色体:位点 SNP ID AB TU 引物(5´~3´) dbSNP ID

04:003254191

DS036864-20

T

G

CTGCTGTTACTGGGTCAGTG ACTGCATGATAATGCCAAAC ss49838683
04:003254203 DS036864-19 G A CTGCTGTTACTGGGTCAGTG

ACTGCATGATAATGCCAAAC

ss49838682
05:015736030 DS002778-2 T C AAACGTGGCAGAAATGAAAC

CCCATTTGTAGAAGAATCCAG

ss49837738
05:025044903 DS009184-1 T C TTGCATTAGAGCCTTATCCTG

TGTTCTTATGCTCTGTGACTG

ss49837839
06:001111132 DS014169-1 T G GAGCAGCGATACTCACACAG

TTCACTAGGTAAGACTCTTGAAGC

ss49837929
06:024875905 DS032220-5 C T TCTCTTTAATGTTGGACTGCTG

CCTTTAATCCATAGCCTTAGC

ss49838470
07:018909158 DS033959 C T GACACATACCTGGCACTCG

TCTCCTGAGAAGGATTCCAC

ss49816684
07:019711091 DS023709 C T CAGTTGAGAAGGGAGAAACG

GCTGTTGGGTTGACTTGC

ss49806847
08:010818674 DS023589-1 G A AGGAAAGACACCATCACTGAG

CTTTAGGCGCAATAACAAGG

ss49838126
08:026974745 DS030842-1 A T TATCTCGGTTAACGGGAGTG

GCAGGGATATTTGACTTGAATG

ss49838389
09:050927124 DS048415-2 G A TTCCCAAATACTGAATCTGC

GGATCTGTTCATCGAGGTTC

ss49838964
10:012029287 DS027483-3 T G CATTTAATAAAGGAATCACTACTCTT

AGTCAGTTTACTAACCTTGCTTT

ss49838277
10:012029405 DS027483-4 T C CATTTAATAAAGGAATCACTACTCTT

AGTCAGTTTACTAACCTTGCTTT

ss49838278
11:019554122 DS025015-3 A G AAAGAGCGTCAAGATGTGTG

GCCTAACAGTACCATTCTTGG

ss49838173
11:026314774 DS033040 C T ATCTCGACAACTCTGCTTCC

AGTCCAGCAGAAATTGCAC

ss49815810
20:031443053 DS053166-2 G A TTAGGACACTCCACCATGAG

TGCATGAAGACAGAGCAGAG

ss49839067
21:013840265 DS028819-10 G A GTCCTTCCTGAAGCACTGAG

TGTGAAAGGTTTTACTGTATTTC

ss49838329
21:017891301 DS023849-2 C A TCTGACACAGGAAATAGTATGG

CGAATCATATGGGAGTCGTT

ss49838138
22:002853759 DS036535-2 G T AACTATGAGGCAGTCCGTTC

AACTGATCCGTGAGTTGTCC

ss49838647

表 B.1 常用实验斑马鱼品系 SNP 分子标记位点(续)

染色体:位点 SNP ID AB TU 引物(5´~3´) dbSNP ID
22:022530591 DS020970-1 A T AAGCTGCTCATGTCACTCG

GGGACAGGGTACAGGTAAGG

ss49838044
23:009386243 DS022349-1 T C GATGAGGACATGAGCTTGG

TGACCAAACACCCTTAAATG

ss49838099
23:009386361 DS022349-7 A T GATGAGGACATGAGCTTGG

TGACCAAACACCCTTAAATG

ss49838105
24:017922488 DS055282-4 A G GAGACGGGCACTGAACAC

GGATGTTTGTCACCCAAAG

ss49839131
24:017922536 DS055282-5 A G GAGACGGGCACTGAACAC

GGATGTTTGTCACCCAAAG

ss49839132
25:033544463 DS024735-2 A G TCTTGACATCGGTGGTGAG

TTGTATTGGTGCTGTGACC

ss49838169

B.5     实验结果

B.5.1        实验鱼检测结果判定

按照表A.15的规定执行。

B.6     结果报告

根据判定结果对实验动物群体出具遗传质量检测报告。

附   录   C

(规范性)

MHC 单倍型实验鸡和实验鸭直接测序检测方法

C.1     基因组DNA的提取

基因组DNA提取方法按照NY/T 1673的规定执行。

C.2     PCR扩增引物

PCR扩增引物序列、片段长度及退火温度按表C.1和表C.2的规定执行。

表 C.1 单倍型实验鸡 PCR 遗传检测引物序列表

扩增片段 引物 引物序列 扩增片段 退火温度(℃)
片段(1) 1F 5′-CCGTGGGATCCTCAGACC-3′ 384 bp 56.4
1R 5′-CGGCACTGCGCCATGGAG-3′
片段(2) 2F 5′-CTGTGTTTCAGGGTCTCACAC-3′ 442 bp 56.4
2R 5′-GCAGGACAAGGTCAGGATC-3′

表 C.2 单倍型实验鸭 PCR 遗传检测引物序列表

扩增片段 引物 引物序列 扩增片段 退火温度(℃)
片段 1F 5′-ATGGAGTTGCTGCCCACCTTGCGCCTG-3′ 984 bp 60
1R 5′-TGAAACCCATCAGGCACCATCCCAGGT-3′

C.3     PCR扩增

C.3.1        PCR扩增体系

PCR总反应体积为15 μL, 其中含10×PCR buffer:1.5 μL,上下游引物(100 pmol/μL) 各1 μL ,4×dNTP 100μmol/L:1 μL ,Taq 酶1 U:1 μL ,50 ng ~ 100 ng 基因组DNA:1 μL , 纯水 (ddH2O) :8.5 μL。PCR反应程序为:95 ℃预变性,4 min;94 ℃变性,30 s;退火温度(各位点序列、PCR反应条件参见表C.1),30 s;72 ℃延伸,30 s;35个循环;72 ℃继续延伸7 min;扩增产物4 ℃保存。

C.3.2        PCR产物的检测

PCR反应结束后,经琼脂糖凝胶电泳检测,检测合格的PCR产物进行测序。测序结果与标准序列进行

比对分析,计算一致率。

C.4     单倍型MHC实验动物标准结果判定

所有样本序列与参考标准序列比对,一致率达100%,判为合格。

C.5     单倍型MHC实验鸡标准序列

C.5.1        B2单倍型实验鸡标准序列

片段(1)

CGTGGGATCCTCAGACCCACACCCGCGGCTCACGGCCCCGCTGCGCTCCGTCCCCGCAGAGCTCCATACCCTGCGGTACATCTCT ACGGCGATGACGGATCCCGGCCCCGGGCAGCCGTGGTACGTGGACGTGGGGTACGTGGACGGGGAACTCTTCACGCACTACAACAGCAC CGCTCGGAGGGCTGTGCCCCGCACCGAGTGGATAGCGGCCAACACGGACCAGCAGTACTGGGACAGAGAGACGCAGATCGCACAGGGCA ATGAGCAGATTGACCGCGAGAACCTGGACATACGGCAGCAGCGCCACAACCAGACCGGCGGTGAGCACGGCCGGGGCCGCGGCTCCGTG GGTGTGGGATGGACTCCATGGCGCAGTGCCG

片段(2)

CTGTGTTTCAGGGTCTCACACGGCGCAGTGGATGTACGGCTGTGACATCCTCGAGGACGGCACCATCCGGGGGTATCATCAGATG GCCTGCGATGGGAGAGACTTCATTGCCCTCGCTGAAGACATGAAGACGTTCACTGCAGCAGTTCCAGAGGCAGTTCCCACCAAGAGGAA ATGGGAGGAAGGAGGTTATGCTGAGAGGAAGAAGCAGTACC-TGGAGGAAACCTGCGTGGAGGGGCTGCGGAGATACGTGGAATACGGG AAGGCTGAGCTGGGCAGGAGAGGTGAGCAGGGT--------GGGGGGGGGGC        CGCAGTGTGGGGCTGGACGTGGGCCGGGGGC

TCAGTGTGGGGAGCTCAGCCCGGCCCTCATTGCCACCCGCCT-GCAGAGCGGCCTGAGGTGCGAGTGTGGGGGAAGGAGGCCGACGGGA   TCCTGACCTTGTCCTGC

C.5.2        B5单倍型实验鸡标准序列

片段(1)

CCGTGGGATCCTCAGACCCCCACCCGCGGCTCACGGCCCCGCTGCGCTCCGCCCCCGCAGAGCTCCATACCCTGCGGTACATCCA TACGGCGATGACGGATCCCGGCCCCGGGCAGCCGTGGTACGTGGACGTGGGGTATGTGGACGGGGAACTCTTCGTGCACTACAACAGCA CCGCGCGGAGGTACGTGCCCCGCACCGAGTGGATGGCGGCCAAGGCGGACCAGCAGTACTGGGATGAACAGACGCAGATCGCACAGGGC AATGAGCGGAGTGTGAAAGTGAGCCTGGACACACTGCAGGAACGATACAACCAGACCGGCGGTGAGCACGGCCGGGGCCGCGGCTCCGT GGGTGTGGGATGGGCTCCATGGCGCAGTGCCG

片段(2)

CTGTGTTTCAGGGTCTCACACGGCGCAGTGGATGTACGGCTGTGACATCCTCGAGGACGGCACCATCCGGGGGTATCATCAGGAG GCCTACGATGGGAGAGACTTCATTGCCTTCGACAAAGGCACGATGACGTTCACTGCGGCAGTTCCAGAGGCAGTTCCCACCAAGAGGAA ATGGGAGGAAGGAGGTGTTGCTGAGGGGCGGAAGCAGTACCTGGAGGAAACCTGTGTGGAGTGGCTGCGGAGATACGTGGAATATGGGA AGGCTGAGCTGGGCAGGAGAGGTGAGTGGGGTGGAGGGGGGGCCACGGTGTGGGGCTGGACATGGGGCGGGGGCTCAGCGTGGGGATCT CAGCCCGGCCCTCACTGCCACCCGCCCGCAGAGCGGCCCGAGGTGCGAGTGTGGGGGAAGGAGGCCGACGGGATCCTGACCTTGTCCTG    C

C.5.3        B13单倍型实验鸡标准序列

片段(1)

CCGTGGGATCCTCAGACCCCCACCCGCGGCTCACGGCCCCGCTGCGCTCCGCCCCCGCAGAGCTCCATACCCTGCGGTACATCCA TACGGCGATGACGGATCCCGGCCCCGGGCAGCCGTGGTACGTGGACGTGGGGTATGTGGACGGGGAACTCTTCGTGCACTACAACAGCA CCGCGCGGAGGTACGTGCCCCGCACCGAGTGGATGGCGGCCAAGGCGGACCAGCAGTACTGGGATGGACAGACGCAGATCGGACAGCGC AATGAGCGGAGTGTGAAAGTGAGCCTGGACACACTGCAGGAACGATACAACCAGACCGGCGGTGAGCACGGCCGGGGCCGCGGCTCCGT GGGTGTGGGATGGGCTCCATGGCGCAGTGCCG

片段(2)

CTGTGTTTCAGGGTCTCACACGGTGCAGTGGATGTTCGGCTGTGACATCCTCGAGGATGGCACCATCCGGGGGTATCGTCAGGTG GCCTACGATGGGAAAGACTTCATTGCCTTCGACAAAGACATGAAGACGTTCACTGCGGCAGTTCCAGAGGCAGTTCCCACCAAGAGGAA ATGGGAGGAAGGAGGTGTTGCTGAGGGGTGGAAGAGTTACCTGGAGGAAACCTGCGTGGAGTGGCTGCGGAGATACGTGGAATACGGGA AGGCTGAGCTGGGCAGGAGAGGTGAGTGGGGTGGGGGGGGGGCCGCGGTGTGGGGCTGGACGTGGGGCGGGGGCTCAGCGTGGGGAGCT CAGCCCGGCCCTCATTGCCACCTGCCTGCAGAGCGGCCTGAGGTGCGAGTGTGGGGGAAGGAGGCCGACGGGATCCTGACCTTGTCCTG    C

C.5.4        B15单倍型实验鸡标准序列

片段(1)

CGTGGGATCCTCAGACCCCCACCCGCGGCTCACGGCCCCGCTGCGCTCCGCCCCCGCAGAGCTCCATACCCTGCGGTACATCCAT ACGGCGATGACGGATCCCGGCCCCGGGCAGCCGTGGTACGTGGACGTGGGGTATGTGGACGGGGAACTCTTCGTGCACTACAACAGCAC CGCGCGGAGGTACGTGCCCCGCACCGAGTGGATGGCGGCCAAGGCGGACCAGCAGTACTGGGATGGACAGACGCAGATCGGACAGCGCA ATGAGCGGAGTGTGAAAGTGAGCCTGGACACACTGCAGGAACGATACAACCAGACCGGCGGTGAGCACGGCCGGGGCCGCGGCTCCGTG GGTGTGGGATGGGCTCCATGGCGCAGTGCCG

片段(2)

CTGTGTTTCAGGGTCTCACACGGTGCAGTGGATGTTCGGCTGTGACATCCTCGAGGATGGCACCATCCGGGGGTATCGTCAGGTG GCCTACGATGGGAAAGACTTCATTGCCTTCGACAAAGACATGAAGACGTTCACTGCGGCAGTTCCAGAGGCAGTTCCCACCAAGAGGAA ATGGGAGGAAGGAGGTGTTGCTGAGGGGTGGAAGAGTTACC-TGGAGGAAACCTGCGTGGAGTGGCTGCGGAGATACGTGGAATACGGG AAGGCTGAGCTGGGCAGGAGAGGTGAGTGGGGT--------GGGGGGGGGGC        CGCGGTGTGGGGCTGGACGTGGGGCGGGGGC

TCAGCGTGGGGAGCTCAGCCCGGCCCTCATTGCCACCTGCCT-GCAGAGCGGCCCGAGGTGCGAGTGTGGGGGAAGGAGGCCGACGGGA   TCCTGACCTTGTCCTGC

C.5.5        B19单倍型实验鸡标准序列

片段(1)

CCGTGGGATCCTCAGACCCCCACCCGCGGCTCACGGCCCCGCTGCGCTCCGCCCCCGCAGAGCTCCATTCCCTGCGGTACGTCCA TACGGCGATGACGGATCCCGGCCCCGGGCTGCCGTGGTTCGTGGACGTGGGGTACGTGGACGGGGAACTCTTCGTGCACTACAACAGCA CCGCGCGGAGGTACGTGCCCCGCACCGAGTGGATGGCGGCCAACACGGACCAGCAGTACTGGGATGGACAGACGCAGATCGGACAGGGC AATGAGCGGAGTGTGAAAGTGAGCTTGAACACACTGCAGGAACGATACAACCAGACCGGCGGTGAGCACGGCCGGGGCCGCGGCTCCGT GGGTGTGGGATGGGCTCCATGGCGCAGTGCCG

片段(2)

CTGTGTTTCAGGGTCTCACACGGTGCAGCTGATGTACGGCTGTGACATCCTCGAGGATGGCACCATCCGGGGGTATCATCAGACA GCCTACGATGGGAGAGACTTCATTGCCTTCGACAAAGGCACGATGACGTTCACTGCGGCAGTTCCAGAGGCAGTTCCCACCAAGAGGAA ATGGGAGGAAGGAGGTGTTGCTGAGAGGTGGAAGAGTTACC-TGGAGGAAACCTGCGTGGAGGGGCTGCGGAGATATGTGGAATACGGG AAGGCTGAGCTGGGCAGGAGAGGTGAGCGGGGTCGGGGTGGGGGGGGGGGGG--CGGACGCAGTGTGGGGCTGGACGTGGGGCGGGGGC TCATCGTGGGGAGCTCAGCCCGGCCCTCACTGCCGCCCACCC-ACAGAGCGGCCTGAGGTGCGAGTGTGGGGGAAGGAGGCTGACGGGA TCCTGACCTTGTCCTGC

C.5.6        B21单倍型实验鸡标准序列

片段(1)

CCGTGGGATCCTCAGACCCCCACCCGCGGCTCACGGCCCCGCTGCGCTCCGCCCCCGCAGAGCTCCATACCCTGCGGTACATCCA TACGGCGATGACGGATCCCGGCCCCGGGCAGCCGTGGTACGTGGACGTGGGGTATGTGGACGGGGAACTCTTCGTGCACTACAACAGCA CCGCGCGGAGGTACGTGCCCCGCACCGAGTGGATGGCGGCCAAGGCGGACCAGCAGTACTGGGATGGACAGACGCAGATCGGACAGCGC

AATGAGCGGAGTGTGAAAGTGAGCCTGGACACACTGCAGGAACGATACAACCAGACCGGCGGTGAGCACGGCCGGGGCCGCGGCTCCGT  GGGTGTGGGATGGGCTCCATGGCGCAGTGCCG

片段(2)

CTGTGTTTCAGGGTCTCACACGGTGCAGTGGATGTTCGGCTGTGACATCCTCGAGGATGGCACCATCCGGGGGTATCGTCAGGTG GCCTACGATGGGAAAGACTTCATTGCCTTCGACAAAGACATGAAGACGTTCACTGCGGCAGTTCCAGAGGCAGTTCCCACCAAGAGGAA ATGGGAGGAAGGAGGTGTTGCTGAGGGGTGGAAGAGTTACC-TGGAGGAAACCTGCGTGGAGTGGCTGCGGAGATACGTGGAATACGGG AAGGCTGAGCTGGGCAGGAGAGGTGAGTGGGGTGGGGGGGGGGCCGCGGTGTGGGGCTGGACGTGGGGCGGGGGCTCAGCGTGGGGAGC TCAGCCCGGCCCTCATTGCCACCTGCCT-GCAGAGCGGCCCGAGGTGCGAGTGTGGGGGAAGGAGGCCGACGGGATCCTGACCTTGTCC   TGC

C.6     单倍型MHC实验鸭参考序列

C.6.1        B1单倍型MHC实验鸭参考序列

ATGGAGTTGCTGCCCACCTTGTGCCTGGCCTGTGTCCTGCTCCTGGCTGACCTGGTCGTGCTGGCAGCACTGGCCCGGTTGGCCC CGGCACTGGCCCAGCTGGGTCTAGTGGCCACATGGCTGGAGGCTGGGCTGCGGCTACCAGTGCTGGTGGGAGCTGGGAGGCTGTTGGCC CCCGGAGGACCCCGGGGAGCCCCGGCCCTGGTGAGCCTGGCCCCTGCCACCTTCCTTACCCTGCGGGGCTGCCTGGAGCTGCCTGGGGC TCCACCAGTGCTGCTGGCCATGGCCACACCGTCCTGGCTGGCATTGGCCTATGGGGCAGTCTTGCTGGCCCTGCTCACCTGGACCTCCC TGGCACCTGGGGTGGCCCTGGGGACCAAGGAGGTCAAGTACCAGGCGGCCCTGCACCGGCAGCTGGCCCTGGCCTGGCCTGAGTGGCCC TTCCTCAGCGGAGCCTTCTTCTTCCTCATGCTGGCTGCATTGGGTGAGACCTCCGTGCCCTACTGCACTGGGAAGGCCTTGGATGTCCT CCGTCATGGGGATGGCCCCACTGCCTTTGCTACTGCCATCGGCTTTGTGTGCCTCGCCTCTGCCAGCAGGTAGGGACCCCCAGTTCCTC TCCCAGACCCTGTCCACACCTGGGATGGTGCCTGATGGGTTTCA

C.6.2        B2单倍型MHC实验鸭参考序列

ATGGAGTTGCTGCCCACCTTGCGCCTGGCCTGTGTCCTGCTCCTGGCTGACCTGGTCGTGCTGGCAGCACTGGCCCGGTTGGCCC CGGCACTGGCACAGCTGGGTCTGGTGGCCACATGGCTGGAGGCTGGGCTGCGGCTACCAGTGCTGGTGGGAGCTGGGAGGCTGTTGGCC CCCGGAGGACCCCAGGGAGCCGCAGCCCTGGTGAGCCTGGCCCCTGCCACCTTCCTTACCCTGCGGGGCTGCCTGGAGCTGCCTGGGGC TCCACCAGTGCTGCTGGCCATGGCCACACCGTCCTGGCTGGCATTGGCCTATGGGGCAGTCTTGCTGGCCCTGCTCACCTGGACCTCCC TGGCACCTGGGGTGGCCCTGGGGACCAAGGAGGTCAAGTACCAGGCGGCCCTGCGCCGGCAGCTGGCCCTGGCCTGGCCTGAGTGGCCC TTCCTCAGCGGAGCCTTCTTCTGCCTCGTGCTGGCTGCATTGGGTGAGACCTCCGTGCCCTACTGCACTGGGAAGGCCTTAGATGTCCT CCGCCATGGGGACGGCCCCACTGCCTTTGCCACTGCCATCGGCTTTGTGTGCCTCGCCTCTGCCAGCAGGTAGGGACCCCCAGTTCCTC TCCCAGAGCCTGTCCACACCTGGGATGGTGCCTGATGGGTTTCA

C.6.3        B3单倍型MHC实验鸭参考序列

ATGGAGTTGCTGCCCACCTTGCGCCTGGCCTGTGTCCTGCTCCTGGCTGACCTGGTGGTGCTCGCAGCACTGGCCCGGTTGGCCC CGGCACTGGCCCAGCTGGGTCTAGTGGCCACATGGTTGGAGGCTGGGCTGCGGCTACCAGTGCTGGTGGGAGCTGGGATGCTGTTGGCC CCCGGAGGACCCCGGGGAGCGGCAGCCCTGGTGAGCCTGGCCCCTGCCACCTTCCTTACCCTGCGGGGCTGCCTGGAGCTGCCTGGGGC TCCACCAGTGCTGCTGGCCATGGCCACACCATCCTGGCTGGCATTGGCCTATGGGGCAGTCTTGCTGGCCCTGCTCACCTGGACCTCCC TGGCACCTGGGGTGGCCCTGGGGACCAAGGAGGTCAAGTACCAGGCGGCCCTGCGCCGGCAGCTGGCCCTGGCCTGGCCTGAGTGGCCC TTCCTCAGCGGAGCCTTCTTCTTCCTCGTGCTGGCTGCATTGGGTGAGACCTCCGTGCCCTACTGCACTGGGAAGGCCTTAGATGTCCT CCGCCATGGGGACGGCCCCACTGCCTTTGCCACTGCCATCGGCTTTGTGTGCCTTGCCTCCGCCAGCAGGTAGGGACCTCCAGTTCCTC TCCCAGACCCTGTCCACACCTGGGATGGTGCCTGATGGGTTTCA

C.6.4        B4单倍型MHC实验鸭参考序列

ATGGAGTTGCTGCCCACCTTGCGCCTGGCCTGTGTCCTGCTCCTGGCTGACCTGGTCGTGCTGGCAGCACTGGCCCAGTTGGCCC CGGCACTGGCCCAGCTGGGTCTAGTGGCCACATGGCTGGAGGCTGGGCTGCGGCTACCAGTGCTGGTGGGAGCTGGGATGCTGTTGGCC CCCGGAGGACCCCGGGGAGCCGCGGCCCTGGTGAGCCTGGCCCCTGCCACCTTTCTTACCCTGCGGGGCTGCCTGGAGCTGCCTGGGGC TTCACCAGTGCTGCTAGCCATGGCCACACCGTCCTGGCTGGCATTGGCCTACGGGGCAGTCTTGCTGGCCCTGCTCACCTGGACCTCCC TGGCACCTGGGGTGGCCCTGGGGACCAAGGAGGTCAAGTACCAGGCGGCCCTGCGCCGGCAGCTGGCCCTGGCCTGGCCTGAGTGGCCC TTCCTCAGTGGAGCCTTCTTCTGCCTCGTGCTGGCTGCATTGGGTGAGACCTCCGTGCCCTACTGCACTGGGAAGGCCTTAGATGTCCT CCGCCATGGGGACGGCCCCACTGCCTTTGCCACTGCCATCGGCTTTGTGTGCCTTGCCTCCGCCAGCAGGTAGGGACCCCCAGTTCCTC TCCTAGACCCTGTCCACACCTGGGATGGTGCCTGATGGGTTTCA

参   考   文   献

[1]     GB 14925—2023 实验动物 环境及设施

[2]     杨芳,何保丽,何永蜀, 等. 树鼩生化与微卫星标记的初步研究[J].昆明医学院学报, 2010,5: 8-11.

[3]     张媛,李晓飞,李振宇, 等. 滇西亚种树鼩微卫星分子标记的筛选[J].中国比较医学杂志, 2015,25: 36-41.

[4]     Fan Y, Huang ZY, Cao CC, et al. 2013. Genome of the Chinese tree shrew[J]. Nature communications, 4:1426.

[5]     Liu XH, Yao YG. Characterization of 12 polymorphic microsatellite markers in the Chinese tree shrew (Tupaia belangeri chinensis) [J],2013, 34(E2):E62-8.

[6]     Xu L, Chen SY, Nie WH, et al. Evaluating the phylogenetic position of Chinese tree shrew ( Tupaia belangeri chinensis) based on complete mitochondrial genome: implication for using tree shrew as an alternative experimental animal to primate in biomedical research[J]. J Genet Genomics,2012, 39( 3) : 131-137.