GB/T 14926.41-2001 《实验动物 无菌动物生活环境及粪便标本的检测方法》

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ICS 65.020.30

B44

GB

中华人民共和国国家标准

GB/T 14926.41-2001

代替GB/T14926.41一1994

实验动物 无菌动物生活环境及粪便标本的检测方法

Laboratory animal-Method for examination of environment and faeces of GF animals

2001-08-29发布

2002-05-01实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布

前言

本标准是对GB/T 14926.41一1994《无特定病原体动物、无菌动物生活环境及粪便标本的检验方法》的修订。

本标准删除了GB/T 14926.41一1994中对无特定病原体动物生活环境及粪便标本的检验，保留无菌动物生活环境及粪便标本的检测并作了如下修改：

增加了硫乙醇酸钠培养基在使用前需煮沸驱氧程序;

在从液体培养基转种血琼脂平皿时增加涂片染色镜检，以防止在转种时因死亡细菌不能在血平皿上生长而漏检。

本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口。

本标准起草单位:中国实验动物学会。

本标准主要起草人：李红。

木标准于1994年1月首次发布。

1 范围

本标准规定了无菌动物生活环境及粪便标本中细菌的检测方法。

本标准适用于无菌小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠和兔的微生物检测。

2 引用标准

下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。

GB/T 14926.43一2001 实验动物 细菌学检测 染色法、培养基和试剂

3 原理

污染无菌动物的微生物主要是细菌(需氧菌和厌氧菌)和真菌，所以通过不同的培养基、不同的培养温度和培养环境可以对污染菌进行检测。

4 主要设备和材料

4.1 普通恒温培养箱。

4.2 生化培养箱

4.3 水平流洁净工作台。

4.4 恒温水浴箱

5 培养基及试剂

5.1 脑心浸液肉汤。

5.2 硫乙醇酸钠肉汤

5.3 大豆蛋白陈肉汤。

5.4 血琼脂平皿

5.5 无菌生理盐水。

6 检测程序

微生物检验流程 (标本)

1. 液体培养基接种 (Inoculation)

脑心浸液肉汤 (BHI)

硫乙醇酸钠培养基 (FTM)

大豆蛋白胨肉汤 (TSB)

2. 初步培养条件 (Incubation)

温度: 25 ~ 28°C

时长: 14 d

3. 鉴定与转种 (Identification)

A. 固体培养观察

接种: 血琼脂平皿

条件: (36±1)°C

观察点: 第 7 天、第 14 天

复核: 48 h 进一步观察

B. 形态学检查

操作 涂片

染色 革兰染色 (Gram Stain)

4. 结果输出 (Final)

报告 (Report)

7.1 采样

将无菌隔离器内饮水、饲料、垫料和新鲜动物粪便等分别收集于无菌小试管中，按无菌动物饲养操作程序从隔离器中取出。

7.2 接种及观察

7.2.1 将硫乙醇酸钠培养基加热煮沸至无色，置45°C水浴箱平衡温度。

7.2.2 按无菌操作程序在水平流洁净工作台中进行样品接种前制备及接种。分别加入少量无菌生理盐水(以没过样品为宜)于待检样品小试管中,用毛细吸管充分吹打。分别吸取0.1~0.5mL样品溶液于上述三种培养基中，其中脑心浸液培养基和硫乙醇酸钠培养基置(36士1)°C培养至少14d,并在培养第7d和第14d涂片、革兰染色镜检,同时接种血琼脂平皿，(36士1)C培养48h,观察有无细菌生长;大豆蛋白陈肉汤培养基置25~28°C培养至少14d，观察有无真菌生长。

8 结果报告

凡镜检未观察到细菌、血琼脂平皿上无细菌生长、大豆蛋白胨培养基无真菌生长者可报告无菌检测合格，其中一项检出细菌或真菌者为不合格。

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