生物净化

生物净化，英文为Rederivation，或BioRederivation，是一种减少或阻止病原体通过一个活体小鼠传染给饲养在屏障设施内的其他小鼠，从而造成屏障内动物的污染的方法。包括胚胎移植（Embryo Transfer）和剖腹产（C-Section）2种。

随着胚胎移植的普及，现在多采用胚胎移植的方法进行净化，已经很少看到剖腹产做净化的单位了。

现在多数IACUC均要求实验动物中心对所有外来小鼠进入繁育房间必须净化。

1. 小鼠生物净化方式

1.1 胚胎移植

胚胎移植是通过从母体（供体，donor female）的输卵管或者子宫中将着床前期的胚胎分离出来后，转移至假孕母鼠（受体，recipient female）的输卵管或者子宫中，最终目的是让移植后的胚胎可以在受体动物生殖道内着床、孕育和出生。

1.2 受精方式

胚胎移植前的受精方式不同又可以分为自然交配取胚胎进行移植（体内交配净化）和通过体外受精（in vitro fertilization，IVF）的方式得到胚胎后进行移植两种方式。惯称体内净化和体外净化（IVF净化）。

无论哪种方式，雌鼠都需要注射激素，进行超数排卵，简称超排。

1.2.1. IVC净化

整个实验过程包括雌鼠超排、收集卵子、采集精子、IVF和胚胎移植，得到小鼠。

这个过程受很多因素影响，如精子的质量直接影响到受精率等。

成功率高，但是也要看精子质量。虽然我们的大量实验数据表明受精率平均60%以上，但我们仍不能保证一次性就可以得到后代。

1.2.2. 体内净化

整个实验过程包括雌鼠超排、雄鼠和超排后的雌鼠交配，检栓，然后处死见栓后的雌鼠，收集受精卵，胚胎移植。

这种方法完全取决于雌鼠见栓率。所以，挑选雌鼠和雄鼠的年龄、健康状况等就非常重要，需要想如何增加见栓率。

3. 如何选择生物净化方式

3.1 IVF净化和体内净化的选择

主要看提供的小鼠能不能有效交配。

IVF净化不需要考虑雌鼠见栓情况，可以有效避免雌雄鼠交配不见栓导致无法净化，耽误时间。

a、IVF净化，需要安乐死一只雄鼠，取精子；超排并安乐死所有提供的雌鼠。推荐和B6等野生型小鼠交配净化的都直接做IVF净化。

b、体内净化，雄鼠交配完成后继续保留，超排并安乐死见栓雌鼠。 无论哪种净化方式，生仔数量和提供卵子的雌鼠数量直接相关。假如见栓高，IVF净化和体内净化得到的小仔数量差不多。

3.2 影响因素

除了根据小鼠能不能有效交配选择外，还需要考虑提供小鼠品系数量、年龄、基因型等，具体要求如下：

3.2.1 小鼠年龄对净化方案选择的影响

小鼠6-8周对激素超排很不敏感，所以要求自己提供雌鼠时，雌鼠年龄需要控制在3-5周或者9-12周及以上。

3.2.2 小鼠不同基因型对净化方案选择的影响

1. 单基因修饰杂合小鼠

• 杂合（heter），日常繁殖就是和B6、FVB、BALB/c等常规品系交配繁殖。
• 假如只有2只雄性，冒进的方法是杀了1只直接做IVF净化，但是可以同xxx-Cre、xxx-Flox等多种小鼠同时进行。剩下的1只雄鼠继续和B6等小鼠交配繁殖，保持有后代产生，以免失败。
• 假如有3只雄鼠，那么肯定选择安乐死1只阳性雄鼠后取精子和B6或其他背景鼠做IVF。
• 一次性可以得到20只以上甚至更多的后代。

2. 单基因修饰纯合小鼠

• 纯合（homo），假如是纯合并不可以和B6交配净化的，只能等待繁育后再安排交配或IVF净化。
• 还有一种方式就是先和B6 等背景IVF净化，得到大量heter后代，之后再通过后代大量交配得到homo。好处是同时还有了使用对照小鼠。

3. 多基因修饰的小鼠

• 假如多个基因都是homo的状态，只能尽快繁育，得到后代后再做交配或IVF净化。
• 这种情况下，最好问对方要小鼠的时候，最好不少于2只雄性，4只雌性。

3.2.3 注意事项

净化实验中见栓的雌鼠都会被处死取胚胎，但并不是每个见栓的小鼠都能取到发育正常的胚胎。所以，请留够雌鼠用于繁殖，不要出现断种的情况。

不是最佳，感觉写的有点啰唆

4. 生物净化需要时长

因实验动物品系不同，其排卵、受孕等操作存在较大差异，因此，净化所需时间每个品系有所不同。一般为2个月后可以拿到4周龄的后代。

5. 净化后的小鼠质量如何保证符合SPF？需不需要检测？

根据清华大学实验动物中心已有净化了6000+品系的数据，净化后动物通过完整的哨兵鼠及随机抽检的体系保障净化后的动物质量符合国家小鼠SPF级别标准。

之前和日本熊本大学CARD研究所沟通过，他们净化了近2000个品系的结果是净化后动物都是符合SPF要求的。