E-2010-实验动物饮用水微生物质量检测标准操作规程

实验动物饮用水微生物质量检测标准操作规程

一、目的

为保障动物福利，避免饮水污染带来的动物健康问题，定期对动物饮用水的微生物质量进行检测，特制定此标准操作规程。

二、适用范围

实验动物中心动物饮用水，包括自动饮水、反渗透水、高压灭菌水、酸化水。

三、检测试剂及材料

R2A琼脂培养基、量筒、锥形瓶、无菌平皿（90mm*15mm）、三角涂布棒、酒精灯、移液管（10ml）、移液器（1000ul、200ul）、离心管（15ml、1.5ml）。

四、检测频率

每月检测一次。

检测不符合要求时，立即停止使用整改，待检测合格后再启用。

五、检测方法

1. 称取R2A琼脂培养基固体粉末18.12g于锥形瓶中，加入1000ml纯化水，加热溶解，121℃高压灭菌15分钟，冷却至50℃左右时，倒入无菌培养皿，4℃冰箱备用。

2. 取样前，用酒精对水管口、水瓶口及周边空间进行彻底消毒。

3. 采集自动饮水和反渗透水时，先打开排水开关，放水1分钟后采集10ml待测水样于灭菌后的15ml离心管内；采集瓶装高压灭菌水及酸化水时，使用移液管取10ml待测水样于灭菌后的15ml离心管内；同时采集10ml已知污染水（如洗刷脏笼盒水）于灭菌后的15ml离心管内作为阳性对照。

4. 将水样放于离心机内离心（4000r/min 10min），富集可能存在的微生物。

5. 将水样转移至生物安全柜内，使用移液器从离心管底部取1ml的富集液转移至灭菌后的1.5m离心管内。

6. 将3只三角涂布棒在75%酒精中浸泡一下，再放于酒精灯上灼烧消毒灭菌，晾凉备用。

7. 取200ul富集液加入到已铺好的R2A琼脂培养基平皿上，用三角涂布棒将富集液在平皿上涂抹均匀，平皿底部标注样品编号、日期、操作人员等。

8. 将平皿倒置放于32℃培养箱内，培养72小时，观察是否有菌落生长。

9. 另取同一批配置的空白平皿同样条件下进行培养，作为阴性对照。

六、结果判定

1. 若培养72h后，平皿中有肉眼可见的菌落生长则为阳性

2. 若培养72h后，平皿中无肉眼可见的菌落生长则为阴性

3. 以上两种结果只有在空白平皿无菌落生长，阳性平皿有菌落生长时检测结果才算有效。