超数排卵

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1. 定义

超数排卵是给雌性供体注射外源性促性腺激素,诱发卵巢和多个卵泡的发育,并排出具有受精能力的卵子的方法,简称“超排”。

2. 原理

通过延长卵泡刺激素(Follicle-stimulating hormone,FSH),也称促卵泡激素阈值窗突破自然周期限制,使原本闭锁的卵泡同步发育。

采用促性腺激素释放激素激动剂(gonadotropin-releasing hormone agonist,GnRHa)药物抑制内源性激素分泌后,外源性促性腺激素刺激多个原始卵泡发育为成熟卵泡(即分裂活跃的细胞),

之后通过注射人绒毛膜促性腺激素(Human chorionic gonadotropin,hCG)等药物触发排卵。

hCG的注射时间一定要在黄体生成素(Luteinizing Hormone,LH)峰值来临之前进行。

3. 操作步骤

将雌性动物先后注射PMSG(Pregnant mare serum gonadotropin)及HCG后,使动物的生殖周期及排卵时间同步化,增加排卵数量。一般比自然情况下多几倍到十几倍的卵子。

  • Day1,在下午4:00 -7:00 之间对3-5周或9-12周的雌鼠注射PMSG,10 IU/只。
  • Day3,在注射PMSG 47小时后,给小鼠注射同样量的HCG,10 IU/只。一般在注射HCG 16-18小时会后手机卵子,因为此时得到的卵子质量最佳。

近年来有使用inhibin抗血清/eCG和hCG联用获得更多胚胎数量的方法出现[1]

4. 超排的影响因素

4.1 用于超排实验的小鼠最佳年龄

小鼠超排的最佳时间是3-5周龄,或者9周龄以上。

注射时间和剂量、不同动物品系会影响超排卵的效果。

常用于需要大量收集卵母细胞及后续的实验。假如注射HCG后和雄性动物交配,那么可以获得大量着床前胚胎用于后续的实验。超排卵对动物的生理和遗传影响正在进一步研究,包括超排卵引起的全局DNA甲基化变化和卵巢周围血管生成的改变。随着对超排卵技术的深入理解和技术的进步,未来有望进一步优化超排卵方案,提高其在动物生殖技术和科研应用中的效果和安全性。

参考文献

  1. Takeo T, Nakagata N (2015) Superovulation Using the Combined Administration of Inhibin Antiserum and Equine Chorionic Gonadotropin Increases the Number of Ovulated Oocytes in C57BL/6 Female Mice. PLoS ONE 10(5): e0128330. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0128330