E-2012-高温高压灭菌器灭菌效果检测标椎操作规程

• 文件名：E-2012-高温高压灭菌器灭菌效果检测标椎操作规程
• 文件编号与版本号：E-2012 V1
• 文件状态：受控
• 文件类型：SOP

1. 检测范围

实验动物中心所有脉动式高温高压灭菌器。以下文件均以山东新华生产的高压灭菌器为例。

实验动物相关灭菌程序

序号	程序名称	灭菌温度	脉动次数	置换时间	灭菌时间	干燥时间
P01	动物饲料灭菌	121	3	\	1200S	900S
P07	垫料灭菌	134	3	\	480S	1200S
P05	固体废弃物灭菌	121	\	900S	2400S	\
P06	BD测试	134	3	\	210S	240S

2. 检测位点

根据灭菌器大小决定检测位点数量。以1.38m³以上灭菌器为例，灭菌器内、外侧门的四角顶点及灭菌器中心点，共计9个点。

2.1 1.38m³以下灭菌器检测位点

E-2012 图1 1.38m³以下灭菌器检测位点.png
（注： *A、B 、C、D为洗消间一侧门的点； *E、F 、G、H为洁存室一侧门的点）

2.2 1.38m³以上灭菌器检测位点

E-2012_图2 1.38m³以上灭菌器检测位点示意图

3. 检测试剂及原理

试剂

新华牌压力蒸汽灭菌标准生物测试包

原理

嗜热脂肪芽孢杆菌对热的抗性较强，利用非致病性的嗜热脂肪芽孢杆菌作为指示菌来测定热力灭菌的效果。

若灭菌器灭菌效果不合格，芽孢未被杀死，可继续在培养基中生长，培养基颜色变为黄色；

若灭菌器灭菌效果合格，芽孢被杀死，培养基颜色不变仍为紫色。

4. 检测频率

4.1 初次使用

每月检测一次。如果连续三次检测结果都合格，那么将检测频率从每月一次调整为每三个月一次。

4.2 最低检测频率

不得少于每三个月一次。

4.3 检测不合格的处置

如果某次检测结果不合格，需要连续两次检测结果合格，才能恢复到每三个月一次的检测频率。

5. 检测方法

1. 在压力蒸汽灭菌生物指示剂表面的标签空白处，记录灭菌管理的必要事项，如编号、灭菌处理日期、操作人员等。
2. 将压力蒸汽灭菌生物指示剂置于灭菌器相应检测点，运行灭菌程序。
3. 灭菌处理后，取出压力蒸汽灭菌生物指示剂，确认标签上的化学指示剂由黄色变为黑色，放置15分钟以上冷却至室温。
4. 用夹子将冷却后的压力蒸汽灭菌生物指示剂内部的安瓿瓶夹破，使菌片充分接触培养基。
5. 确认菌片浸于培养基后，放于58℃培养箱中培养48h。
6. 另取一只同批号未灭菌的压力蒸汽灭菌生物指示剂，夹破安瓿瓶后同样条件下进行培养，作为阳性对照。
7. 确认灭菌效果后，将标签取下粘贴在记录簿上，同时对压力蒸汽灭菌生物指示剂拍照留档。

6. 结果判定

E-2012_图3 灭菌后结果示意图（注：最左侧为阴性对照；上下2排A→I均为灭菌合格）

1. 若培养48后，生物指示剂由紫色变化黄色，表示灭菌不合格。
2. 若培养48后，生物指示剂颜色保持紫色不变，表示灭菌合格。
3. 以上两种结果只有在对照管（培养不超过24 小时）为阳性其生物检测结果才算有效。
   如阴性，可能的原因为：培养条件不符合要求；生物指示剂有问题（应及时查出阴性原因）。

7. 注意事项

1. 灭菌完毕，含生物指示剂的包裹很热并有一定的压力，需至少冷却10分钟以上，否则可能引起塑料管内的安瓿破裂，飞溅的碎片导致损伤；
2. 只有对照管为阳性，其生物检测结果才算有效；
3. 压力蒸汽灭菌生物指示剂储存于15 ℃~30 ℃；相对湿度为35%~60%的干燥环境中，避光（包括太阳光、荧光灯及紫外消毒灯），避免靠近灭菌器和化学消毒剂。

8. 版权说明

此文章由中国医学科学院基础医学研究所实验动物中心吕安老师编制，常在修改后发表。 适用于LabAnimalWiki:隐私政策。