E-3001-三溴乙醇（Avertin）的配制及发放标准操作规程

三溴乙醇（Avertin）作为啮齿类使用的非管制类麻醉剂，现在被广泛使用在小鼠的麻醉。

1. 背景

E-3001-图1. 三溴乙醇（tribromoethanol）和叔戊醇（tertiary amyl alcohol）

三溴乙醇（Avertin）作为一种非管制类外科麻醉剂，常用于啮齿类动物的操作，如胚胎移植、输精管结扎术等。其麻醉诱导迅速、效果充分且并发症较少，因而得到了广泛应用。

然而，关于其安全范围狭窄和严重副作用的报告，如术后死亡、腹膜粘连，以及在未间隔足够时间后再次麻醉引发的高死亡率，已引发了兽医及使用者的关注。尽管这些副作用尚未被广泛证实，近年来的研究显示，三溴乙醇的副作用可能与麻醉剂液体中的分解产物有关。

根据文献和清华大学实验动物中心的使用经验，三溴乙醇在适当的配制和使用条件下仍被认为是安全有效的，尤其是没有更好的替代品情况下。非药物级别的Avertin的使用需要IACUC审阅通过，工作液需严格按照无菌配制，并在14天内使用完毕。

2. Avertin麻醉剂配制及使用指南

2.1. 试剂信息

• tribromoethyl alcohol (2, 2, 2 tribromoethanol), Sigma-Aldrich T48402。见链接：https://www.sigmaaldrich.cn/CN/zh/product/aldrich/t48402

• tertiary amyl alcohol (2 methyl-2-butanol), Sigma-Aldrich 240486。见链接：https://www.sigmaaldrich.cn/CN/zh/product/sial/240486

2.2. 100%原液配制方法

2.2.1 取10 g三溴乙醇（tribromoethanol）到离心管中，加入10 ml叔戊醇（tertiary amyl alcohol），握在手中震摇，直至三溴乙醇完全溶解，0.22um滤膜过滤后即配制成100%储液。
注：10 g溶于 10 ml，终体积会大于10 ml，约为12.5 ml。相当于三溴乙醇的浓度低了。只有这种相对低的浓度才不会析出结晶，进而减少一定概率的麻醉致死。

储液用锡箔纸包好后，常温避光保存。配制工作液前注意观察储液是否有结晶析出，如有请握在手中溶解，混合液必须澄清后，才可以进行稀释。

2.2.2 缓解Avertin分解的方法是使用棕色玻璃瓶或包锡箔纸的瓶子进行包装。
如果不避光保存Avertin或储存在4℃冰箱会导致刺激性的分解产物形成，可能引起动物腹膜炎甚至死亡。

2.2.3 下面的流程可用于在使用前测试分解产物：

• a. 如果初始溶液的PH值>5，那么可以在5 ml麻醉剂中加一滴刚果红（0.1% w/v）即可显示分解产物是否存在。
• b. 在PH值<5时，显示分解产物为二溴乙酸基乙醛和氢溴酸。如果出现这种情况，由于存在毒性物质，可能会在注射24小时内引起动物死亡，那么这批次麻醉剂应该抛弃不用。

2.3. 2.5%Avertin工作液配制方法

2.3.1 取1 ml原液垂直加入离心管底，加入39 ml 0.9%生理盐水，加入生理盐水时尽量使溶液贴壁滑入管内，以免底部的Avertin原液溅起到管壁上造成析出，注意加入生理盐水后勿摇晃。

注：此处使用1 ml原液，加入39 ml 0.9%生理盐水。很关键。
因为上面10 ml 三溴乙醇10 ml叔戊醇后体积为12.5 ml，按照标准的2.5%，应取1.25 ml原液，加入38.75 ml 0.9%生理盐水。但是这种配出来的也容易导致动物麻醉致死。

2.3.2 然后放入37 ℃温箱中静置4小时，4小时后上下颠倒混匀，使原液与生理盐水充分混合后即可使用。

2.3.3 暂时不使用的可以在4 ℃冰箱短时间储存。使用前升温至37 ℃并摇晃均匀。
正确存储的情况下，推荐在2周内使用。由于长时间存储的工作液成分会析出或分解，造成麻醉效果下降，甚至腹膜炎。所以使用前请务必确定标签上的配制日期，并观察是否变色或有结晶析出。

2.3.4 每一批配制的工作液必须要进行B6小鼠麻醉效果测试。

2.4. Avertin使用方法

2.4.1 Avertin使用动物种类仅限小鼠。

2.4.2 2.5%的Avertin工作液采用腹腔注射（IP.）方式麻醉小鼠，使用剂量0.14-0.18 ml/10g体重，即1.9-3.85 mg/10g体重，190-385 mg/kg体重。

2.4.3 上述剂量在小鼠外科手术时大约可维持17~70分钟麻醉时间。请根据手术时间选择合适的剂量，必要时可按麻醉剂量的1/3补加延长麻醉时间。

2.4.4 具体2.5%Avertin注射剂量与深麻时长和脱离深麻时长量效关系图如下。结果表示剂量越大，深麻醉时间越长，苏醒时间也越长。使用加热垫保温有助缩短恢复时间。

E3001_2.5%Avertin注射剂量与深麻时长和脱离深麻时长量效关系图

2.5. 注意事项

2.5.1. 麻醉剂在使用前应恢复至室温。如发现有雾晶析出为正常现象，用手握住，振摇加速溶解后使用。

2.5.2. 严格按照推荐剂量范围给药，如加大注射剂量需要提前测试，以免动物出现异常甚至致死。

2.5.3. Avertin工作液可用于较短时间的存活或非存活性手术、终末期安乐死。

2.5.4. 三溴乙醇必须使用叔戊醇配制吗？

答案：是的。

在最早的文献中三溴乙醇和叔戊醇是单独用于麻醉和镇静的，在最早的文献中有报道叔戊醇本身的镇静作用。