H-2005-小鼠卵巢移植标准操作规程

1. 目的

卵巢移植是指将受体鼠的卵巢摘除，将供体鼠卵巢移入受体鼠的卵巢系膜中。受体卵巢系膜将供体鼠的卵巢固定在正确的位置上后，受体鼠与移植后卵巢会重新建立血液供给关系，卵巢会对垂体激素做出反应并排出成熟卵子。

为了使实验动物中心生物净化及转基因平台卵巢移植实验更加规范，提供优质的技术服务，方便本平台工作人员学习，特制订本标准操作规程。

适用于在清华大学实验动物中心进行的挽救不能存活或存活率很低的基因修饰雌鼠所进行的卵巢移植活动。

手术器械（剪刀，镊子，止血钳，75 %乙醇等），供体雌鼠或冷冻解冻的卵巢，受体雌鼠（与供体同背景），麻醉剂阿佛丁，M2，DPBS。

3.2.1. 将受体鼠麻醉，麻醉好之后，背部开口，将卵巢，输卵管与子宫暴露。类似胚胎移植前期处理。

3.2.2. 在输卵管开口处（输卵管伞部）的对侧用显微剪将卵巢膜剪一个小口。卵巢膜的开口最好不要大过取出受体鼠卵巢所需的最小开口尺寸，这样移入的供体卵巢就可以被卵巢囊膜固定在适当的位置上。通过开口用显微镊夹住卵巢，将卵巢1/2左右移出。这一操作可能会导致出血并流入卵巢囊膜。

3.2.3. 处死或麻醉供体鼠并取出一侧或两侧卵巢，置于M2中，清洗、去除脂肪。根据卵巢大小分解为2~4块。将取出的卵巢尽可能快的移植。冷藏后卵巢在移植手术前，需要在M2培养液中温育10分钟。

3.2.4. 用显微镊将供体卵巢移入卵巢囊膜中，供体卵巢一定要被囊膜包裹，血液会促进供体和受体卵巢的融合。

3.2.5. 将卵巢、输卵管、子宫复位，缝合伤口。

4.1. 每一个供体鼠有两个卵巢，最后可以得到1只以上受体鼠。

4.2. 移植卵巢后的雌鼠通常在手术后2周可以建立繁殖笼。

4.3. 未成年雌鼠卵巢可以移植到最早5周龄的受体鼠中（通常我们会使用8周左右的受体鼠），因为它的卵巢膜要比年龄大一些的小鼠的囊膜小。

4.4. 将卵巢移入受体鼠后要一直等到受体鼠到达繁殖周龄时才可排卵或者与雄鼠合笼繁育，如果受体鼠状态不好，则将移入的卵巢取出重新移入其他受体鼠中。