H-2007-小鼠生物净化（单侧附睾IVF+胚胎移植)标准操作规程

1. 目的

为了保留单只雄鼠的生育能力，满足快速大量得到子代的目的，更加规范操作，提供优质的技术服务，方便本平台其他工作人员学习，特制订本标准操作规程。

只有1只雄鼠的小鼠品系快速大量繁育。

获能滴TYH（35×10mm皿），50 ul/滴；受精滴HTF（35×10 mm皿），200 ul/滴（高滴操作）；准备采集附睾和输卵管的培养皿（装有500 ul矿物油）；洗卵滴（培养滴）HTF（35 ×10 mm皿），80 ul/滴；最后矿物油覆盖，37 ℃，5% CO2培养箱预热，半小时以上。

麻醉剂Avertin（0.12-0.15 ml/10 g），麻醉好后，皮下注射镇痛剂（0.02 ml/10 g），酒精灯烧热眼科剪，取出一侧附睾，缝合。雄鼠恢复2周后，可以再与雌鼠合笼建立繁殖笼繁育。

3.4. 获能皿油内采集鲜精，显微剪在附睾头部剪口，采集精子拉入获能滴内，培养箱内上游1 h左右（精子计数，1 - 25 ×106 精子/ml ）熟练操作的工作人员可以根据经验，通过眼睛目测判断。

3.5. 安乐死雌鼠（3-5 w或9-12 w），HCG16-18 h后，取输卵管收集卵子。

3.6. 手术纸上，去除输卵管上残留的的脂肪和血。

3.7. 受精培养皿油内采集卵子，显微镜下显微镊撕破输卵管膨大部，带有卵丘细胞的卵子游离出来，拉入受精滴内。

3.8. 上游好的精子加入受精滴内，3-5ul/滴。

3.9. 受精4-6h后，捡卵，洗涤死精和颗粒细胞。

3.10. 培养过夜，收集2细胞胚胎。

3.11. 胚胎移植：

转移胚胎（2-cell）到代孕受体内或在KSOM /M16培养液内培养。根据不同实验需求，对胚胎进行处理。