H-2008-超数排卵小鼠注射用激素配制标准操作规程
- 文件名：H-2008-超数排卵小鼠注射用激素配制标准操作规程
- 文件编号与版本号：H-2008 V1
- 文件状态：受控
- 文件类型：SOP
1. 目的
为了使清华大学实验动物中心生物净化与转基因平台注射用血促性素（PMSG）和注射用绒促性素（HCG）配制更加规范，促进实验小鼠超数排卵稳定性，特制订本操作规程。
2. 适用范围
实验动物中心生物净化、体外受精、显微注射等相关实验小鼠超数排卵所用的试剂。
3. 内容
尽管大多数品系小鼠推荐的激素剂量是腹腔注射5 IU，但对于有些品系小鼠2.5 IU或者多达10 IU效果可能更好。清华大学实验动物中心使用的是宁波三生生物科技有限公司出售的冻干粉沫，注射前用生理盐水把PMSG和HCG稀释成50 IU/ml，推荐注射剂量为10 IU/只（即0.2 ml/只）。
3.1. 试剂
3.1.1. 注射用血促性素PMSG（厂家：宁波三生生物科技有限公司，货号：110914564，单位：1000单位/支）。
3.1.2. 注射用绒促性素 HCG （厂家：宁波三生生物科技有限公司，货号：110911282，单位：1000单位/支）。
3.1.3. 生理盐水（500 ml/瓶）分装到50 ml离心管，40 ml/每管，封口膜封口，标注溶液名称、分装日期待用。
3.2. 配制流程
3.2.1. 用50 ml注射器抽取分装好的生理盐水，取2支PMSG，打开PMSG安剖瓶盖，加入2 ml生理盐水，将PMSG粉末混匀，倒入50 ml离心管内。
3.2.2. 再继续往PMSG瓶内加入2 ml生理盐水，倒入50 ml离心管，反复操作3-5次，将PMSG残留冲洗干净。
3.2.3. 将注射器内剩余生理盐水全部打入离心管，拧好盖子，颠倒摇匀。
3.2.4. 将配制好的PMSG分装到1.5 ml离心管，平均1.2 ml/管，放入冰箱-20度保存。
3.2.5. HCG同PMSG配制流程。
4. 注意事项
4.1. 每购入新一批次PMSG和HCG记录产品批号和购入日期并进行测试实验，平均每只鼠超排可得到30-50枚及以上卵子，方可用于实验。
4.2. 配制好的PMSG和HCG在-20 ℃保存1个月内用完。
4.3. 解冻和稀释后的激素必须立即使用并且不能再冻，在稀释和储存激素时要特别注意无菌操作，因为激素容易被细菌降解。
5. 参考文献
- 清华大学实验动物中心SOP及网站。本网站已经获得使用许可，转载。其他网站使用，请联系用户:Changzai