小鼠附睾尾低温冷藏运输标准操作规程:修订间差异
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为了确定附睾尾冷藏运输体系的实际操作问题,提高效率获得更多活体后代,本中心对冷藏运输体系的包装运输,冷藏精子体外受精(IVF)和胚胎移植进行标准化,以提高冷藏运输体系的效率,减少小鼠使用量,践行3R(替代Replacement、减少Reduction、优化Refinement)。 | 为了确定附睾尾冷藏运输体系的实际操作问题,提高效率获得更多活体后代,本中心对冷藏运输体系的包装运输,冷藏精子体外受精(IVF)和胚胎移植进行标准化,以提高冷藏运输体系的效率,减少小鼠使用量,践行3R(替代Replacement、减少Reduction、优化Refinement)。 | ||
== 1. 目的 == | |||
为了避免活体小鼠长途运输价格昂贵,并携带传染病以及运输途中动物逃跑或死亡的风险,而使用附睾冷藏运输相对简单且有效避免以上风险。 | 为了避免活体小鼠长途运输价格昂贵,并携带传染病以及运输途中动物逃跑或死亡的风险,而使用附睾冷藏运输相对简单且有效避免以上风险。 | ||
== 2. 适用范围 == | |||
雄鼠处于性成熟期以上,至少8-10周龄(12-18周龄最佳)。取附睾后,运输时间在3天时间内(附睾精子在低温下保持受精能力可达72h)。 | 雄鼠处于性成熟期以上,至少8-10周龄(12-18周龄最佳)。取附睾后,运输时间在3天时间内(附睾精子在低温下保持受精能力可达72h)。 | ||
== 3. 实验内容 == | |||
=== 3.1. 实验准备 === | |||
1.5ml EP管若干,手术器械(眼科剪,眼科镊,消毒液等),温度数据记录仪,4度保温相关材料,矿物油([Sigma:M8410](https://www.sigmaaldrich.com/catalog/search?term=m8410&interface=All_ZH&N=0&mode=partialmax&lang=en®ion=US&focus=product))等。 | 1.5ml EP管若干,手术器械(眼科剪,眼科镊,消毒液等),温度数据记录仪,4度保温相关材料,矿物油([Sigma:M8410](https://www.sigmaaldrich.com/catalog/search?term=m8410&interface=All_ZH&N=0&mode=partialmax&lang=en®ion=US&focus=product))等。 | ||
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每个品系最好收集2只雄鼠的附睾,以免运输单只雄鼠附睾,精子质量不好。 | 每个品系最好收集2只雄鼠的附睾,以免运输单只雄鼠附睾,精子质量不好。 | ||
== 3.2. 附睾准备运输步骤 == | |||
每个品系2只雄鼠(一般可以请所在单位的动物中心协助完成): | |||
a) 准备4个含矿物油(常温)EP管,1ml/EP管,用于放置保存附睾。 | *a) 准备4个含矿物油(常温)EP管,1ml/EP管,用于放置保存附睾。 | ||
b) 取附睾,放入含矿物油的EP管中清洗一次,附睾保存在第二个EP管内。 | *b) 取附睾,放入含矿物油的EP管中清洗一次,附睾保存在第二个EP管内。 | ||
c) 包装附睾相关包温材料在使用前应冷却并保持4-8℃ | *c) 包装附睾相关包温材料在使用前应冷却并保持4-8℃ | ||
d) 将存有附睾的EP管放在4℃冰箱,联系顺丰快递,放在冰盒内运输。最多存放3天。 | *d) 将存有附睾的EP管放在4℃冰箱,联系顺丰快递,放在冰盒内运输。最多存放3天。 | ||
=== 3.3. 附睾低温运输 === | |||
到达本中心的冷藏精子复苏(建议以下全部在动物中心完成): | |||
a) 准备获能液TYH滴,受精液HTF+GSH滴(现配现用,GSH浓度是浓度是0.307mg/ml)。100 ul/滴 ,矿物油覆盖,37℃。 | *a) 准备获能液TYH滴,受精液HTF+GSH滴(现配现用,GSH浓度是浓度是0.307mg/ml)。100 ul/滴 ,矿物油覆盖,37℃。 | ||
b) 从冰箱中取出存有附睾的EP管,显微镜下从附睾内取出精子到获能滴TYH。 | *b) 从冰箱中取出存有附睾的EP管,显微镜下从附睾内取出精子到获能滴TYH。 | ||
c) 精子获能0.5-1h后,取3-5ul(精子质量差可以增加量)加入至100ul HTF+GSH受精滴内与雌鼠卵子受精。 | *c) 精子获能0.5-1h后,取3-5ul(精子质量差可以增加量)加入至100ul HTF+GSH受精滴内与雌鼠卵子受精。 | ||
d) 受精4-6h后,洗涤受精卵3次,放在HTF滴(80ul/滴)内培养过夜 | *d) 受精4-6h后,洗涤受精卵3次,放在HTF滴(80ul/滴)内培养过夜 | ||
e) 收集2-cell胚胎进行胚胎移植。 | *e) 收集2-cell胚胎进行胚胎移植。 | ||
== 4. 参考文献 == | |||
*清华大学实验动物中心SOP及网站。本网站已经获得使用许可,转载。其他网站使用,请联系[[用户:Changzai]] | |||
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[[分类:实验动物技术 胚胎操作]] |
2025年4月18日 (五) 08:46的版本
近几年,基因修饰小鼠的跨省交换不断增加,简便安全,低成本的运输方式尤为重要。
现在小鼠品系运输有活体运输,冻存遗传物质运输和组织细胞冷藏运输,其中活体运输和冻存遗传物质是普遍选择的方式。
2012年,我们做过快递公司4°C冷链运输附睾尾并成功获得活体小鼠的实验。
最近有2批成功案例分享给大家,我们整理成了标准操作规程(SOP),希望可以为师生降低费用,增加效率。
为了确定附睾尾冷藏运输体系的实际操作问题,提高效率获得更多活体后代,本中心对冷藏运输体系的包装运输,冷藏精子体外受精(IVF)和胚胎移植进行标准化,以提高冷藏运输体系的效率,减少小鼠使用量,践行3R(替代Replacement、减少Reduction、优化Refinement)。
1. 目的
为了避免活体小鼠长途运输价格昂贵,并携带传染病以及运输途中动物逃跑或死亡的风险,而使用附睾冷藏运输相对简单且有效避免以上风险。
2. 适用范围
雄鼠处于性成熟期以上,至少8-10周龄(12-18周龄最佳)。取附睾后,运输时间在3天时间内(附睾精子在低温下保持受精能力可达72h)。
3. 实验内容
3.1. 实验准备
1.5ml EP管若干,手术器械(眼科剪,眼科镊,消毒液等),温度数据记录仪,4度保温相关材料,矿物油([Sigma:M8410](https://www.sigmaaldrich.com/catalog/search?term=m8410&interface=All_ZH&N=0&mode=partialmax&lang=en®ion=US&focus=product))等。
每个品系最好收集2只雄鼠的附睾,以免运输单只雄鼠附睾,精子质量不好。
3.2. 附睾准备运输步骤
每个品系2只雄鼠(一般可以请所在单位的动物中心协助完成):
- a) 准备4个含矿物油(常温)EP管,1ml/EP管,用于放置保存附睾。
- b) 取附睾,放入含矿物油的EP管中清洗一次,附睾保存在第二个EP管内。
- c) 包装附睾相关包温材料在使用前应冷却并保持4-8℃
- d) 将存有附睾的EP管放在4℃冰箱,联系顺丰快递,放在冰盒内运输。最多存放3天。
3.3. 附睾低温运输
到达本中心的冷藏精子复苏(建议以下全部在动物中心完成):
- a) 准备获能液TYH滴,受精液HTF+GSH滴(现配现用,GSH浓度是浓度是0.307mg/ml)。100 ul/滴 ,矿物油覆盖,37℃。
- b) 从冰箱中取出存有附睾的EP管,显微镜下从附睾内取出精子到获能滴TYH。
- c) 精子获能0.5-1h后,取3-5ul(精子质量差可以增加量)加入至100ul HTF+GSH受精滴内与雌鼠卵子受精。
- d) 受精4-6h后,洗涤受精卵3次,放在HTF滴(80ul/滴)内培养过夜
- e) 收集2-cell胚胎进行胚胎移植。
4. 参考文献
- 清华大学实验动物中心SOP及网站。本网站已经获得使用许可,转载。其他网站使用,请联系用户:Changzai