E-3001-三溴乙醇(Avertin)的配制及发放标准操作规程
三溴乙醇(Avertin)作为啮齿类使用的非管制类麻醉剂,现在被广泛使用在小鼠的麻醉。
1. 背景
三溴乙醇(Avertin),作为外科麻醉剂广泛应用于啮齿类动物,比如胚胎移植、输精管结扎术、Southern Blot分析的断尾术等。诱导迅速、麻醉效果充足以及很少出现麻醉并发症,使得这一麻醉剂得到广泛应用。
尽管如此,一些关于三溴乙醇的安全范围低和严重副作用的报告,已经引起兽医在选用时产生顾虑。副作用的报告包括术后死亡、腹膜纤维粘连以及不考虑两个剂量时间间隔后实施第二个麻醉剂量后的高死亡率。这些报告结论还没有得到进一步证实。近来更多的报告没有证实三溴乙醇麻醉剂的副作用,相反却证实了它的优势。现在人们普遍接受了三溴乙醇产生的各种麻醉结果,包括报道的副作用,都是由于在麻醉剂储存液体中产生了分解的产物。
通过近年来已经得到文献认可的正面追溯,结合清华大学校内研究人员良好的使用效果,表明三溴乙醇是一个安全有效的麻醉药品。由于目前还没有其他可接受的替代品,提倡使用三溴乙醇作为麻醉剂,在用于小鼠短期手术操作时,需遵守如下规定:a)根据如下方法配制麻醉剂;b)按下面措施实施,可以避免分解。
IACUC批准可以使用非药物级别的Avertin作为麻醉剂,但必须按照以下配制和使用方法。其他类的非药物级别的麻醉剂使用也必须通过IACUC的同意。此类药物的准备必须是过滤达到无菌,并且在14日内使用完毕。
2. Avertin麻醉剂配制及使用指南
2.1. 试剂信息
- tribromoethyl alcohol (2, 2, 2 tribromoethanol), Sigma-Aldrich T48402。见链接:https://www.sigmaaldrich.cn/CN/zh/product/aldrich/t48402
- tertiary amyl alcohol (2 methyl-2-butanol), Sigma-Aldrich 240486。见链接:https://www.sigmaaldrich.cn/CN/zh/product/sial/240486
2.2. 100%原液配制方法
2.2.1 取10 g三溴乙醇(tribromoethanol)到离心管中,加入10 ml叔戊醇(tertiary amyl alcohol),握在手中震摇,直至三溴乙醇完全溶解,0.22um滤膜过滤后即配制成100%储液。
注:10 g溶于 10 ml,终体积会大于10 ml,约为12.5 ml。相当于三溴乙醇的浓度低了。只有这种相对低的浓度才不容易导致麻醉致死。
储液用锡箔纸包好后,常温避光保存。配制工作液前注意观察储液是否有结晶析出,如有请握在手中溶解,混合液必须澄清后,才可以进行稀释。
2.2.2 缓解Avertin分解的方法是使用棕色玻璃瓶或包锡箔纸的瓶子进行包装。
如果不避光保存Avertin或储存在4℃冰箱会导致刺激性的分解产物形成,可能引起动物腹膜炎甚至死亡。
2.2.3 下面的流程可用于在使用前测试分解产物:
- a. 如果初始溶液的PH值>5,那么可以在5 ml麻醉剂中加一滴刚果红(0.1% w/v)即可显示分解产物是否存在。
- b. 在PH值<5时,显示分解产物为二溴乙酸基乙醛和氢溴酸。如果出现这种情况,由于存在毒性物质,可能会在注射24小时内引起动物死亡,那么这批次麻醉剂应该抛弃不用。
2.3. 2.5%Avertin工作液配制方法
2.3.1 取1 ml原液垂直加入离心管底,加入39 ml 0.9%生理盐水,加入生理盐水时尽量使溶液贴壁滑入管内,以免底部的Avertin原液溅起到管壁上造成析出,注意加入生理盐水后勿摇晃。
注:此处使用1 ml原液,加入39 ml 0.9%生理盐水。很关键。
因为上面10 ml 三溴乙醇10 ml叔戊醇后体积为12.5 ml,按照标准的2.5%,应取1.25 ml原液,加入38.75 ml 0.9%生理盐水。但是这种配出来的也容易导致动物麻醉致死。
2.3.2 然后放入37 ℃温箱中静置4小时,4小时后上下颠倒混匀,使原液与生理盐水充分混合后即可使用。
2.3.3 暂时不使用的可以在4 ℃冰箱短时间储存。使用前升温至37 ℃并摇晃均匀。
正确存储的情况下,推荐在2周内使用。由于长时间存储的工作液成分会析出或分解,造成麻醉效果下降,甚至腹膜炎。所以使用前请务必确定标签上的配制日期,并观察是否变色或有结晶析出。
2.3.4 每一批配制的工作液必须要进行B6小鼠麻醉效果测试。
2.4. Avertin使用方法
2.4.1 Avertin使用动物种类仅限小鼠。
2.4.2 2.5%的Avertin工作液采用腹腔注射(IP.)方式麻醉小鼠,使用剂量0.14-0.18 ml/10g体重,即1.9-3.85 mg/10g体重,190-385 mg/kg体重。
2.4.3 上述剂量在小鼠外科手术时大约可维持17~70分钟麻醉时间。请根据手术时间选择合适的剂量,必要时可按麻醉剂量的1/3补加延长麻醉时间。
2.4.4 具体2.5%Avertin注射剂量与深麻时长和脱离深麻时长量效关系图如下。结果表示剂量越大,深麻醉时间越长,苏醒时间也越长。使用加热垫保温有助缩短恢复时间。
2.5. 注意事项
2.5.1. 麻醉剂在使用前应恢复至室温。如发现有雾晶析出为正常现象,用手握住,振摇加速溶解后使用。
2.5.2. 严格按照推荐剂量范围给药,如加大注射剂量需要提前测试,以免动物出现异常甚至致死。
2.5.3. Avertin工作液可用于较短时间的存活或非存活性手术、终末期安乐死。
3. 参考文献
- http://cshprotocols.cshlp.org/content/2006/1/pdb.rec701.full?text_only=true
- 清华大学实验动物中心SOP及网站。本网站已经获得使用许可,转载。其他网站使用,请联系用户:Changzai